[發明專利]一種活細胞中Cr3+

有效

• 申請號: 201710615551.2
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN109307661B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發明（設計）人: 曾晞;方浚安;阮琴;牟蘭
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/38
• 代理公司: 貴州聯德佳為知識產權代理事務所(普通合伙) 52123
• 代理人: 張梅

1.一種活細胞中Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺的熒光成像方法，其特征在于：以化合物N,N’,N’’-三[4-(苯并噻唑-2-基)-2,5-二羥基苯甲醛]縮-(3-氨乙基)胺作為活細胞內微量金屬離子Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺的熒光成像探針，探針與活細胞相容，滲透到細胞內，通過探針對細胞內Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺染色后，用熒光倒置顯微鏡檢測熒光細胞圖像；所述的探針的化學結構式為：

?；

所述的通過探針對細胞內Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺染色后，用熒光倒置顯微鏡檢測熒光細胞圖像，是按下述方法進行：

（1）細胞培養：活細胞經復蘇接種于含10%胎牛血清以及含1%雙抗的培養基中，在培養箱中培養，傳代后，接種于12孔板中培養，密度為2×10⁴個/ml，次日用培養基清洗細胞；

（2）探針對細胞孵育：將（1）的細胞中加入探針濃度為10~40μM的培養液，培養箱內孵育30~80min，吸出含探針的培養液，用培養基清洗細胞，置于熒光倒置顯微鏡下分別進行明場和暗場拍照，明場下觀察到細胞清晰的圖像，暗場下沒有觀察到細胞圖像；所述培養液的組成為體積比為98%培養基和2%?N,N-二甲基甲酰胺；

（3）Cr³⁺對細胞染色：將（2）的細胞中加入由體積比為9/1的培養基/H₂O組成的Cr³⁺濃度為60~120μM的溶液，培養箱中孵育30~60min，用培養基清洗細胞，置于熒光倒置顯微鏡的藍色通道下觀察探針對細胞內Cr³⁺染色后的熒光像，細胞呈現明亮的藍色熒光，拍攝得到清晰的藍色熒光細胞輪廓影像，探針在活細胞中檢測到微量Cr³⁺離子；

（4）Al³⁺對細胞染色：將（2）的細胞中加入由體積比為9/1的培養基/H₂O組成的Al³⁺濃度為60~120μM的溶液，培養箱中孵育30~60min，用培養基清洗細胞，置于熒光倒置顯微鏡的藍色通道下觀察探針對細胞內Al³⁺染色后的熒光像，細胞呈現明亮的藍色熒光，拍攝得到清晰的藍色熒光細胞輪廓影像，探針在活細胞中檢測到微量Al³⁺離子；

（5）探針對細胞孵育：將（1）的細胞中加入探針濃度為10~40μM的培養液，培養液的組成為體積比為98%培養基，2%?1,4-二氧六環，培養箱內孵育20~60min，吸出含探針的培養液，用培養基清洗細胞，置于熒光倒置顯微鏡下分別進行場明場和暗場拍照，明場下觀察到細胞清晰的圖像，暗場下沒有觀察到細胞圖像；

（6）Zn²⁺對細胞染色：將（5）的細胞中加入由體積比為9/1的培養基/H₂O組成的Zn²⁺濃度為60~120μM的溶液，培養箱中孵育30~80min，用培養基清洗細胞，置于熒光倒置顯微鏡的綠色通道下觀察探針對細胞內Zn²⁺染色后的熒光像，細胞呈現綠色熒光，拍攝得到清晰的綠色熒光細胞輪廓影像，探針在活細胞中檢測到微量Zn²⁺離子；再將上述細胞置于熒光倒置顯微鏡的紅色通道下觀察探針對細胞內Zn²⁺染色后的熒光像，細胞呈現紅色熒光，拍攝得到清晰的紅色熒光細胞輪廓影像，探針在活細胞中檢測到微量Zn²⁺離子；

所述的熒光倒置顯微鏡是藍色通道的激發波長為330~385nm，綠色通道的激發波長為450nm~490nm，紅色通道的激發波長為510nm~550nm的熒光倒置顯微鏡。

2.如權利要求1所述的活細胞中Cr³⁺、Al³⁺或Zn²⁺的熒光成像方法，其特征在于：所述的培養基是RPMI-1640培養基。