[發明專利]一種同步檢測PCV2和PRV感染的引物序列及方法

在審

• 申請號: 201710614696.0
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN107227380A
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發明（設計）人: 黃華榮;羊雪芹;李婧雅;王德全;袁秀芳
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙)11465
• 代理人: 王鵬

1.一種同步檢測PCV2和PRV感染的引物序列，其特征在于：包括PCV2病毒引物序列和PRV病毒引物序列；其中，所述PCV2病毒引物序列包括上游引物PCV2-F1和下游引物PCV2-F2；所述PRV病毒引物序列包括上游引物PRV-F3和下游引物PRV-F4；所述PCV2-F1、PCV2-F2、PRV-F3和PRV-F4的核苷酸序列分別如序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

2.一種同步檢測PCV2和PRV感染的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)根據GenBank中登錄的PCV2ORF2基因和PRV gH基因的核苷酸序列設計如權利要求1所示的兩對特異性引物；

(2)使用所述兩對特異性引物對待測樣本進行復合PCR擴增，得到PCR產物，進行瓊脂糖凝膠電泳檢測；若出現470bp大小的條帶，則待測樣品中含有PCV2病毒；若出現298bp大小的條帶，則待測樣品中含有PRV病毒。

3.根據權利要求2所述的一種同步檢測PCV2和PRV感染的方法，其特征在于：所述復合PCR擴增的反應體系為50.0μL，其中：10×Buffer 5.0μL、2.0mM MgCl₂4.0μL、200μM dNTPs 5.0μL、0.1μM PCV2-F11.0μL、0.1μM PCV2-F2 1.0μL、0.2μM PRV-F32.0μL、0.2μM PRV-F42.0μL、rTaq DNApolymerase 0.5μL、DNA模板2.0μL、ddH₂O 27.5μL。

4.根據權利要求2所述的一種同步檢測PCV2和PRV感染的方法，其特征在于：所述復合PCR擴增的反應程序為95℃5min；94℃30s，56℃30s，72℃45s，35個循環；最后72℃延伸10min。