[發明專利]一種鐵皮石斛內生真菌菌株及其產生的胞外多糖以及該胞外多糖的提取方法與應用

有效

• 申請號: 201710614605.3
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN107904177B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 婁文勇;曾英杰;王洪峰;宗敏華;梁靜
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/04;C08B37/00;A01P1/00;A61P31/04;C12R1/77
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

本發明公開了一種鐵皮石斛內生真菌菌株及其產生的胞外多糖以及該胞外多糖的提取方法與應用。該鐵皮石斛內生真菌菌株屬于甘蔗鐮孢霉菌。本發明鐵皮石斛內生真菌菌株產生的胞外多糖對包括金黃色葡萄球菌以及枯草芽孢桿菌的致病菌具有很好的抑制活性作用。本發明通過如下流程提取所述胞外多糖：菌株活化?種子液培養?發酵培養?發酵液真空抽濾?抽濾液真空濃縮?濃縮液醇沉?沉淀離心?沉淀水溶后透析?透析液真空冷凍干燥?獲得所述胞外多糖。本發明的提取方法為大規模提取鐵皮石斛內生真菌菌株產生的胞外多糖提供了新路徑，同時為通過改進內生真菌與宿主植物的相互作用提高胞外多糖產量提供新的思路。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種鐵皮石斛內生真菌菌株及其產生的胞外多糖以及該胞外多糖的提取方法與應用。

背景技術

二十一世紀以來內生真菌的研究重點在于對植物內生真菌的研究與開發利用。我國的藥用植物資源豐富多樣，利用內生菌資源庫，發掘出代謝產物中低毒、高效、低廉的抗癌藥物、抗菌藥物、殺蟲劑、抗氧化劑、植物激素、免疫抑制劑等具有非常重要的意義。

鐵皮石斛為蘭科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium)多年生附生草本植物，分布于安徽、浙江、江西、廣東、廣西、云南、貴州等省區，既是名優花卉又是傳統名貴中藥材，秦漢時期的《神農本草經》一記載鐵皮石斛“主傷中、除痹、下氣、補五臟虛勞贏瘦、強陰、久服厚腸胃”；成書于一千多年前的道家醫學經典《道藏》將鐵皮石斛列為“中華九大仙草”之首；為千百年來歷代帝皇夢寐以來的寶物，素有“千金草”之稱，馳名中外，被國際藥用植物界稱為“藥界大熊貓”。民間稱其為“救命仙草”。一般生長在人跡罕至的深山老林和懸崖峭壁上的陰面崖縫間。鐵皮石斛通過風及蟲傳播繁殖,從種子萌發進入到商品階段需2-3 年才能采收。由于鐵皮石斛特殊的生長環境和自身繁殖極為困難，以及人們的過度采挖，目前鐵皮石斛的野生資源已日趨減少，至1987年，被列為國家重點保護野生植物，在《中國植物紅皮書》中被列為瀕危種，現己成為國家二級保護植物。

此外，鐵皮石斛的主要活性成分為多糖，藥理藥效研究也顯示其主要藥用成分為多糖化合物，目前已在其中分離得到近30種多糖化合物，但是至今仍鮮有關鐵皮石斛內生真菌及其相關活性的報道。

利用植物內生真菌這一尚未深入挖掘的寶庫，同時植物內生真菌在篩選活性物質方面，表現出的巨大潛力，合成的次生代謝產物不但化學成分豐富。而且也具有多種多樣的生物活性的特點，選取傳統藥用植物鐵皮石斛(Dendrobium Officinale)作為宿主植物分離內生真菌，針對從鐵皮石斛根部篩選的內生真菌進行形態和分子生物學鑒定，并對其產生的胞外多糖的抗菌活性進行研究。發掘鐵皮石斛內生真菌中具有高活性的寶貴天然藥物資源，以期為人類健康發展做出應有的貢獻。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鐵皮石斛內生真菌菌株，該菌株屬于甘蔗鐮孢霉菌(Fusarium sacchari)，是采用內生真菌分離純化技術從鐵皮石斛 (DendrobiumoffiCinale Kimura et Migo)植物活體中分離、純化得到。

本發明的目的還在于提供所述的一種鐵皮石斛內生真菌菌株產生的胞外多糖，該胞外多糖具有良好的抑制病原菌的效果。

本發明的目的還在于提供一種提取所述的鐵皮石斛內生真菌菌株產生的胞外多糖的方法，該方法包括如下流程：菌株活化-種子液培養-發酵培養-發酵液真空抽濾-抽濾液真空濃縮-濃縮液醇沉-沉淀離心-沉淀水溶后透析-透析液真空冷凍干燥-獲得凍干粉，即為所述胞外多糖。

本發明的目的還在于提供所述的一種鐵皮石斛內生真菌菌株產生的胞外多糖在抑制病原菌中的應用。

本發明的目的通過如下技術方案實現。