[發(fā)明專利]一種利用熱輔助甲酯化?氣相色譜法測定聚山梨酯80中脂肪酸組成的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710609482.4
• 申請日: 2017-07-25
• 公開（公告）號: CN107462654A
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃忠平;邱若風(fēng);王麗麗
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/68
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司33201
• 代理人: 黃美娟,朱思蘭

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種測定聚山梨酯80中脂肪酸組成的方法，特別涉及一種熱輔助甲酯化-氣相色譜法測定聚山梨酯80中脂肪酸組成的方法。

(二)背景技術(shù)

聚山梨酯80系油酸山梨坦和環(huán)氧乙烷聚合而成的聚氧乙烯20油酸山梨坦，是一種非離子型表面活性劑，具有高的表面活性，常作為乳化劑、增溶劑和穩(wěn)定劑被廣泛應(yīng)用于食品、化妝品和藥品等。

隨著近年來研究的不斷深入，藥劑中的聚山梨酯80與臨床產(chǎn)生的不良反應(yīng)有關(guān)。2015年版中國藥典中規(guī)定聚山梨酯80的品質(zhì)主要從以下幾個方面進(jìn)行控制：(1)聚山梨酯80中乙二醇、二甘醇、環(huán)氧乙烷、二氧六環(huán)等雜質(zhì)殘留量；(2)聚山梨酯80的過氧化值；(3)聚山梨酯80的脂肪酸組成。

2010年版中國藥典規(guī)定聚山梨酯80的脂肪酸組成成分中，油酸含量不得低于58.0％。隨著我國國際化程度的不斷加深，為了與歐盟及美國標(biāo)準(zhǔn)相接軌，2015年版中國藥典規(guī)定除了油酸含量不得低于58.0％以外，對其他脂肪酸的含量做進(jìn)一步的限定，包括肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、亞油酸與亞麻酸的含量分別不得大于5.0％、16.0％、8.0％、6.0％、 18.0％與4.0％。

目前針對聚山梨酯80的脂肪酸組成測定方法主要有氣相色譜法和液相色譜法。藥典中采用三氟化硼甲醇加熱回流的方法將脂肪酸進(jìn)行甲酯化處理，然后測定聚山梨酯80的脂肪酸組成。該方法樣品前處理步驟復(fù)雜，耗時長，消耗大量有機(jī)溶劑。文獻(xiàn)中報道采用高效液相色譜-電噴霧檢測器和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對聚山梨酯80中的脂肪酸組成進(jìn)行分析，但依然需要采用皂化、萃取等樣品前處理方法，同時采用的儀器設(shè)備比較昂貴，不利于方法的普及和推廣。

熱輔助衍生化-氣相色譜技術(shù)是近年來迅速發(fā)展的用于有機(jī)酸、醇類、酚類和胺類等物質(zhì)分析的有效方法。該方法將樣品與衍生化試劑如四甲基氫氧化銨(TMAH)等同時加入裂解器或混合后直接注入氣相色譜進(jìn)樣口中，目標(biāo)物中的羧基、羥基、氨基等基團(tuán)在高溫下與衍生化試劑瞬間反應(yīng)，生成相應(yīng)的酯類衍生物并立即被載氣帶入氣相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離分析，過量的衍生化試劑則分解成醇類和胺類，隨載氣流出色譜柱。該方法無需繁瑣耗時的前處理步驟，操作簡單、定量準(zhǔn)確、靈敏度高，在帶極性基團(tuán)化合物的復(fù)雜樣品的快速分析中起著越來越重要的作用。

因此本發(fā)明擬開發(fā)一種操作簡單、分析速度快、準(zhǔn)確度高的檢測方法，用于聚山梨酯80 中脂肪酸組成的測定。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種利用氣相色譜法對聚山梨酯80中脂肪酸的甲酯化產(chǎn)物進(jìn)行定性、定量分析的方法，并在此基礎(chǔ)上優(yōu)化了色譜分離條件、熱輔助甲酯化條件等；本發(fā)明建立了聚山梨酯80中脂肪酸組成的熱輔助甲酯化-氣相色譜法的整體分析方案；測定了6種不同純度的聚山梨酯80樣品的脂肪酸組成。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種利用熱輔助甲酯化-氣相色譜法測定聚山梨酯80中脂肪酸組成的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)精確稱取如下脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品：肉豆蔻酸甲酯、棕櫚酸甲酯、棕櫚油酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯與亞麻酸甲酯，用甲醇溶解配制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

推薦所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液中，各脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的濃度均為0.1mg/mL；

(2)吸取步驟(1)中配制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(推薦進(jìn)樣量1μL)置于樣品杯中，將樣品杯放入裂解器中，將裂解器置于氣相色譜儀進(jìn)樣口處，當(dāng)裂解爐溫度達(dá)到250-400℃(優(yōu)選300℃) 時進(jìn)樣，用氣相色譜儀在線檢測，得到脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜圖，作為定性分析的依據(jù)；

所述氣相色譜條件：色譜柱為RB-5(30m×0.25mm×0.25μm)，升溫程序?yàn)槌鯗?0℃，以10℃/min速率升到200℃，保持10min，以5℃/min速率升到250℃，保持10min；進(jìn)樣口溫度為300℃，檢測器為FID，溫度為300℃，分流比30:1；載氣為氮?dú)猓魉?.0mL/min；

裂解器條件：裂解爐溫度：250-400℃(優(yōu)選300℃)；裂解器與氣相色譜儀接口溫度300℃；

(3)精密稱定聚山梨酯80樣品，用甲醇溶解配制成樣品溶液，再將樣品溶液與衍生化試劑混合，超聲混勻得到待測溶液；

推薦所述樣品溶液中，聚山梨酯80樣品的濃度為10mg/mL；

所述衍生化試劑為0.2mol/L的三甲基氫氧化硫的甲醇溶液；

推薦所述樣品溶液與衍生化試劑按體積比1：2混合；