[發(fā)明專利]適用于MALDI?TOF檢測的微生物培養(yǎng)液處理方法及快速鑒定方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710607214.9
• 申請(qǐng)日: 2017-07-24
• 公開（公告）號(hào): CN107219110A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李濤;劉飛;蒲曉允;張立群;蔣棟能;項(xiàng)貴明;黃微微
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;G01N27/62
• 代理公司: 北京同恒源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11275
• 代理人: 趙榮之

1.適用于MALDI-TOF檢測的血培養(yǎng)陽性菌懸液處理方法，其特征在于，包括如下步驟：將血培養(yǎng)陽性菌懸液加入冰醋酸裂解紅細(xì)胞，離心去除上清，沉淀加入體積分?jǐn)?shù)10％的冰醋酸溶液裂解紅細(xì)胞，混勻后再次離心，去上清，沉淀即為待測物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述適用于MALDI-TOF檢測的血培養(yǎng)陽性菌懸液處理方法，其特征在于，包括如下步驟：將血培養(yǎng)陽性菌懸液中加入相當(dāng)于菌懸液體積0.2倍的冰醋酸裂解紅細(xì)胞，在12000g條件下離心2min，去上清，再向沉淀中加入體積分?jǐn)?shù)10％的冰醋酸溶液，混勻，再次12000g離心2min，去上清，沉淀即為待測物。

3.基于MALDI-TOF快速鑒定血培養(yǎng)陽性瓶中微生物的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將血培養(yǎng)標(biāo)本收到血培養(yǎng)瓶后放入全自動(dòng)血培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行檢測，儀器報(bào)陽性后，取出陽性血培養(yǎng)瓶，無菌條件下從培養(yǎng)瓶中取出培養(yǎng)液，制成菌懸液；

(2)將步驟(1)制成的菌懸液按照權(quán)利要求1或2所述的方法處理，制得待測物；

(3)將步驟(2)制得的待測物均勻涂布于質(zhì)譜靶板上，風(fēng)干，再加入體積分?jǐn)?shù)70％的甲酸溶液，風(fēng)干，然后加入α-氰基-4-羥基肉桂酸基質(zhì)溶液，風(fēng)干；最后將靶板放入質(zhì)譜儀，用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)儀器進(jìn)行校正后對(duì)樣品進(jìn)行質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集；

(4)將采集的質(zhì)譜數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫中的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)，得出質(zhì)譜評(píng)分，記錄質(zhì)譜評(píng)分及對(duì)應(yīng)的微生物的種屬，實(shí)現(xiàn)微生物的鑒定。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(3)中，所述標(biāo)準(zhǔn)品由以下方法制備：將標(biāo)準(zhǔn)品溶液加到質(zhì)譜靶板上，風(fēng)干，再加入α-氰基-4-羥基肉桂酸基質(zhì)風(fēng)干即可。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(3)中，所述α-氰基-4-羥基肉桂酸基質(zhì)溶液的濃度為10mg/mL。