[發明專利]一種黃石斛種苗組織培養快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201710606809.2
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN107306791A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 曾宋君;史月龍;吳坤林;鄭楓
• 申請（專利權）人: 南京仙草堂生物科技有限公司;中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙)32251
• 代理人: 王華

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，特別涉及一種黃石斛種苗組織培養快速繁殖方法。

背景技術

黃石斛（Dendrobiumtosaense Makino）屬于蘭科石斛屬，僅產于我國江西、廣東、臺灣地區及日本等地，常被誤認為鐵皮石斛，在日本和我國臺灣地區已被作為中藥材廣泛應用，產量比鐵皮石斛產量高，具有抗腫瘤、抗衰老、增強人體免疫力及擴張血管等作用；同時，黃石斛花朵黃綠色，具有較高的觀賞價值，可應用于盆栽觀賞，具有廣闊的應用前景。但由于黃石斛種源稀缺，嚴重地制約了其產業的發展。

目前世界上還沒有黃石斛種苗繁殖專利和文獻報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種黃石斛種苗組織培養快速繁殖方法。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供的技術方案是：一種黃石斛種苗組織培養快速繁殖方法，包括下列步驟：

第一步：在超凈工作臺上，將外植體切除葉片后用酒精浸泡，然后用升汞溶液消毒，再用無菌水沖洗，接下來再用升汞溶液消毒，然后再用無菌水沖洗；然后接種到外植體培養基上；其中：所述外植體培養基為改良MS培養基，在改良MS培養基的基礎上添加3.0-5.0毫克/升6-芐基腺嘌呤、3.0-5.0毫克/升激動素、1.0-2.0毫克/升萘乙酸以及改進MS培養基質量的10-20%的椰子汁，所述改良MS培養基為大量元素減半的MS培養基；

第二步：接種后每隔35-45天更換所述外植體培養基一次，至第5次時開始將所述外植體培養基中的6-芐基腺嘌呤和激動素濃度均降至1.5－2.5毫克/升，培養得到叢生芽；

第三步：將第二步培養得到的叢生芽切割成單個芽，然后接種到生根壯苗培養基上進行培養，得到完整植株；所述生根壯苗培養基為改進MS培養基，在改進MS培養基的基礎上添加0.5-1.0毫克/升的萘乙酸、0.5-1.0毫克/升的吲哚丁酸、50-150克/升的香蕉汁、0.5-1.0克/升的活性炭，所述改進MS培養基為1/2 MS培養基；

第四步：將完整植株轉移到具有自然光的溫室中煉苗10-15 天，然后洗凈根部的培養基，接下來用苔蘚包裹所述完整植株的根系，然后以苔蘚為基質種植進行培養。

優選的技術方案為：所述外植體為黃石斛當年生嫩芽。

優選的技術方案為：所述黃石斛當年生嫩芽在作為外植體之前，先用500-800倍的多菌靈澆灌一次黃石斛，并且用500-800倍的多菌靈噴施葉片；一星期之后再用72%的農用鏈霉素可溶性粉劑的3000-4000倍液澆灌一次黃石斛，并用72%的農用鏈霉素可溶性粉劑的3000-4000倍液噴施葉片，然后兩周內重復一次。

優選的技術方案為：接種前用消過毒的解剖刀切取長度2-4厘米的黃石斛側芽為外植體。

優選的技術方案為：將外植體用體積濃度為70-80%的酒精浸泡30-60秒。

優選的技術方案為：所述升汞溶液的質量百分比濃度為0.1%。

優選的技術方案為：所述苔蘚使用之前用水浸泡24-48小時。

上述技術方案中：所述MS培養基是Murashige和Skoog于1962年為煙草細胞培養設計的，其特點是無機鹽和離子濃度較高，是較穩定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養分的數量和比例合適，能滿足植物細胞的營養和生理需要，因而適用范圍比較廣，多數植物組織培養快速繁殖用它作為培養基的基本培養基。基于此，這種培養基就用他們的名字來命名了。大量元素是指：NH₄NO₃、KNO₃、CaCl₂·2H₂O、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄。

由于上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有的優點是：

本發明采用一年生嫩芽進行組織培養繁殖，具有繁殖速度快、種苗品質優良、后代性狀統一等特點，只需要簡單的組織培養設備就可以完成。

具體實施方式

以下對本發明之實施方式做更詳細的說明，使熟悉該項技藝者在閱讀本說明書后能據以實施。

本文中使用的術語的目的僅在于說明特別實施例，并不意圖對本發明做限制。除非上下文明確顯示，否則本文中使用的單數形式“一”、“一個”、“該”亦旨在包括復數形式。