[發(fā)明專利]一種黃石斛種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710606809.2
• 申請(qǐng)日: 2017-07-24
• 公開（公告）號(hào): CN107306791A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾宋君;史月龍;吳坤林;鄭楓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京仙草堂生物科技有限公司;中國科學(xué)院華南植物園
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 蘇州翔遠(yuǎn)專利代理事務(wù)所(普通合伙)32251
• 代理人: 王華

1.一種黃石斛種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：包括下列步驟：

第一步：在超凈工作臺(tái)上，將外植體切除葉片后用酒精浸泡，然后用升汞溶液消毒，再用無菌水沖洗，接下來再用升汞溶液消毒，然后再用無菌水沖洗；然后接種到外植體培養(yǎng)基上；其中：所述外植體培養(yǎng)基為改良MS培養(yǎng)基，在改良MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加3.0-5.0毫克/升6-芐基腺嘌呤、3.0-5.0毫克/升激動(dòng)素、1.0-2.0毫克/升萘乙酸以及改進(jìn)MS培養(yǎng)基質(zhì)量的10-20%的椰子汁，所述改良MS培養(yǎng)基為大量元素減半的MS培養(yǎng)基；

第二步：接種后每隔35-45天更換所述外植體培養(yǎng)基一次，至第5次時(shí)開始將所述外植體培養(yǎng)基中的6-芐基腺嘌呤和激動(dòng)素濃度均降至1.5－2.5毫克/升，培養(yǎng)得到叢生芽；

第三步：將第二步培養(yǎng)得到的叢生芽切割成單個(gè)芽，然后接種到生根壯苗培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，得到完整植株；所述生根壯苗培養(yǎng)基為改進(jìn)MS培養(yǎng)基，在改進(jìn)MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加0.5-1.0毫克/升的萘乙酸、0.5-1.0毫克/升的吲哚丁酸、50-150克/升的香蕉汁、0.5-1.0克/升的活性炭，所述改進(jìn)MS培養(yǎng)基為1/2 MS培養(yǎng)基；

第四步：將完整植株轉(zhuǎn)移到具有自然光的溫室中煉苗10-15 天，然后洗凈根部的培養(yǎng)基，接下來用苔蘚包裹所述完整植株的根系，然后以苔蘚為基質(zhì)種植進(jìn)行培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃石斛種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：所述外植體為黃石斛當(dāng)年生嫩芽。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黃石斛種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：所述黃石斛當(dāng)年生嫩芽在作為外植體之前，先用500-800倍的多菌靈澆灌一次黃石斛，并且用500-800倍的多菌靈噴施葉片；一星期之后再用72%的農(nóng)用鏈霉素可溶性粉劑的3000-4000倍液澆灌一次黃石斛，并用72%的農(nóng)用鏈霉素可溶性粉劑的3000-4000倍液噴施葉片，然后兩周內(nèi)重復(fù)一次。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃石斛種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：接種前用消過毒的解剖刀切取長度2-4厘米的黃石斛側(cè)芽為外植體。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃石斛種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：將外植體用體積濃度為70-80%的酒精浸泡30-60秒。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃石斛種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：所述升汞溶液的質(zhì)量百分比濃度為0.1%。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃石斛種苗組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于：所述苔蘚使用之前用水浸泡24-48小時(shí)。