[發明專利]基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體及其應用在審
| 申請號： | 201710606285.7 | 申請日： | 2017-07-24 |
| 公開（公告）號： | CN107400679A | 公開（公告）日： | 2017-11-28 |
| 發明（設計）人： | 尹東;胡開順;陳恒星;李瑜 | 申請（專利權）人： | 中山大學孫逸仙紀念醫院 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/62;C12N5/10 |
| 代理公司： | 廣州市華學知識產權代理有限公司44245 | 代理人： | 崔紅麗,裘暉 |
| 地址： | 510120 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 轉座酶 建立 表達 穩定 質粒 載體 及其 應用 | ||
1.基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體，其特征在于：
所述的質粒載體是含有IRDR-L-IRDR-R盒的雙鏈環狀質粒，所述IRDR-L-IRDR-R盒包括IRDR-L序列、啟動子、標簽序列、attR1序列、反向選擇性標記基因序列、attR2序列、篩選基因序列和IRDR-R序列；
所述的標簽序列為HA標簽序列、Myc標簽序列、Flag標簽序列或V5標簽序列。
2.根據權利要求1所述的基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體，其特征在于：
所述的IRDR-L序列為SEQ ID NO.1中自5′端第8877位～9103位堿基的反向互補序列；
所述的IRDR-R序列為SEQ ID NO.1中自5′端第5731位～5958位堿基。
3.根據權利要求1所述的基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體，其特征在于：
所述的啟動子為CAG啟動子。
4.根據權利要求1所述的基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體，其特征在于：
所述的HA標簽序列為SEQ ID NO.1中自5′端第1172位～1201位堿基；
所述的Myc標簽序列為SEQ ID NO.2所示；
所述的Flag標簽序列為SEQ ID NO.3所示；
所述的V5標簽序列為SEQ ID NO.4所示。
5.根據權利要求1所述的基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體，其特征在于：
所述的attR1序列為SEQ ID NO.1中自5′端第1211位～1335位堿基；
所述的attR2序列為SEQ ID NO.1中自5′端第2791位～2915位堿基的反向互補序列。
6.根據權利要求1所述的基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體，其特征在于：
所述的反向選擇性標記基因序列是指自殺基因ccdB。
7.根據權利要求1所述的基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體，其特征在于：
所述的篩選基因為抗性與熒光篩選基因，或抗性篩選基因。
8.根據權利要求1所述的基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體，其特征在于：
所述的抗性篩選基因是指嘌呤霉素抗性基因；
所述的熒光篩選基因是指綠色熒光蛋白基因。
9.根據權利要求8所述的基于轉座酶建立過表達穩定系的質粒載體，其特征在于：
所述的嘌呤霉素抗性基因的序列為SEQ ID NO.1中自5′端第3464位～4063位堿基；
所述的綠色熒光蛋白基因的序列為SEQ ID NO.1中自5′端第4704位～5438位堿基。
10.權利要求1～9任一項所述的質粒載體在快速構建過表達穩定株中的應用。
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