[發明專利]一種人血清中抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體-MMAE偶聯物中和抗體檢測方法

在審

• 申請號: 201710603627.X
• 申請日: 2017-07-23
• 公開（公告）號: CN109280687A
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發明（設計）人: 陳秋宇;譚青喬
• 申請（專利權）人: 上海有臨醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N33/53
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一種檢測人血清中抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體?MMAE偶聯物中和抗體的方法，包括如下步驟：應用SK?BR?3細胞系作為靶細胞，研究藥物生物活性；使用藥物作為抗原免疫食蟹猴，使用藥物F(ab)’2片段加強免疫，制備陽性多抗；應用SPE萃取技術對血清樣本進行前處理，消除血清干擾，提高方法穩定性和藥物耐受能力；基于藥物活性方法開發中和抗體檢測方法，應用于經處理后的血清樣本中中和抗體的檢測。本發明的方法源自基于細胞水平的生物活性方法，直接反映藥物分子作用機理MoA；應用對藥物作用更為敏感的SK?BR?3細胞，有利于方法靈敏度的提高；陽性對照抗體通過免疫非人靈長類制備，與真實樣本的可比性更強；血清樣本經前處理后再進行檢測，檢測結果更為穩定可靠。

技術領域

本發明涉及一種抗體藥物偶聯物中和抗體檢測方法，具體是一種基于細胞水平分析方法檢測人血清中抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體-MMAE偶聯物中和抗體的方法。

背景技術

抗體藥物偶聯物（ADC, Antibody-drug conjugate）是一種新型的治療性蛋白藥物，由三個部分組成，針對特定靶點的抗體，通過化學修飾的連接子（linker）與具有細胞毒性的小分子藥物共價結合而形成。ADC通過其抗體分子結構區域與腫瘤細胞表面過表達的抗原靶點結合，達到特定部位，而經過特殊設計的連接體保證了其在到達特定位點之前的穩定性，從而特異性地釋放小分子毒物。與抗原結合后，ADC刺激靶細胞發生內化作用而進入細胞。在胞內溶酶體作用下發生降解并釋放小分子毒性藥物。小分子藥物在胞內與其特定靶點（如微管蛋白等）結合，通過抑制增殖、促進凋亡等發揮毒性作用殺死細胞。同時有些抗體存在抗腫瘤活性，如Kadcyla中曲妥珠單抗（trastuzumab）可與小分子藥物DM1發揮協同作用。ADC通常用于腫瘤領域疾病的治療，與傳統的小分子化藥相比，因具有靶向性強、毒副作用弱、半衰期長等優勢，從而具有廣闊的應用前景。

作為一種蛋白藥物復合物，ADC由于其分子結構的復雜性，給藥物的免疫原性風險評估帶來挑戰。蛋白藥物的免疫反應一般通過體液免疫途徑介導，因此檢測藥物誘導產生的抗藥抗體（Anti-drug antibody, ADA）成為免疫原性分析的重要指標。對于ADC藥物而言，其免疫原性可能來自裸抗分子、linker、小分子藥物以及偶聯過程中產生的新位點（neo-epitope），而對確認為陽性的抗藥抗體進行進一步的表位鑒定及中和抗體分析，可以幫助我們更好的理解并評價其免疫性質。蛋白藥物的中和抗體（Neutralizing antibody，NAb）是指一類可以中和藥物生物學活性的抗藥抗體，直接影響藥物的臨床療效。同時對于具有一定內源性的藥物而言，中和抗體的產生也會帶來嚴重的安全問題，因此中和抗體的分析也已成為法規的必然要求。據報道，Kadcyla大約有5% ADA陽性率，目前未出現中和抗體的報道。而分子結構中包含人鼠嵌和抗體的Adcetris，其ADA陽性率高達37%，且約有60%的ADA具有中和活性。