[發明專利]一種人血清中抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體-MMAE偶聯物中和抗體檢測方法在審
| 申請號： | 201710603627.X | 申請日： | 2017-07-23 |
| 公開（公告）號： | CN109280687A | 公開（公告）日： | 2019-01-29 |
| 發明（設計）人： | 陳秋宇;譚青喬 | 申請（專利權）人： | 上海有臨醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/02 | 分類號： | C12Q1/02;G01N33/53 |
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| 地址： | 201203 上海*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 血清樣本 人表皮生長因子受體 中和抗體檢測 單克隆抗體 生物活性 中和抗體 偶聯物 前處理 人血清 應用 制備 加強免疫 檢測結果 抗原免疫 細胞水平 研究藥物 陽性對照 藥物分子 藥物活性 藥物耐受 藥物作用 作用機理 萃取技術 靶細胞 可比性 靈敏度 食蟹猴 種檢測 檢測 血清 抗體 樣本 細胞 敏感 開發 | ||
1.一種檢測人血清中抗人表皮生長因子受體2單克隆抗體-MMAE偶聯物中和抗體的方法，包括如下步驟：
步驟一，應用SK-BR-3人乳腺癌細胞系作為靶細胞，研究藥物增殖抑制活性，選擇EC50左右濃度作為固定的藥物濃度；
步驟二，使用藥物作為抗原免疫食蟹猴，使用藥物分子F(ab)’2片段加強免疫，經藥物親和純化制備多抗,用作陽性對照；
步驟三，應用固相萃取技術從人血清中提取ADA，消除基質干擾，提高藥物耐受能力。
步驟四，人血清樣本經步驟三處理后，檢測抗藥抗體中和活性。
2.根據權利要求1所述的應用SK-BR-3作為靶細胞研究藥物生物活性，其特征是，來源于人類乳腺癌細胞，細胞表面高表達HER2蛋白。其對藥物作用非常敏感，細胞增殖抑制EC50在10 ng/mL左右。
3.根據權利要求1所述的使用藥物作為抗原免疫食蟹猴，制備陽性多抗，其特征是，免疫非人靈長類制備的多抗，與真實樣本產生的抗藥抗體具有較強可比性。初次免疫后，使用藥物分子F(ab)’2加強免疫，提高抗體中抗idiotype抗體的比例，從而提高陽性對照抗體的中和活性，同樣有利于提高方法的靈敏度。
4.根據權利要求1所述的人血清前處理方法，應用步驟三固相萃取技術定向萃取其中的ADA，可消除血清干擾，提高方法的穩定性；同時可提高方法的藥物耐受能力，提高血藥存在情況下檢測結果的可信度。
5.根據權利要求1所述的中和抗體檢測方法，其特征是，該方法通過基于細胞水平的活性方法轉換而來，直接反映藥物作用機理（MoA），并且呈劑量-效應關系，分析結果在臨床上具有實際參考意義。
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