[發明專利]一種用于測定D-二聚體含量的化學發光板的包被方法

有效

• 申請號: 201710602083.5
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN107247138B
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發明（設計）人: 王賢俊;何丹
• 申請（專利權）人: 王賢俊
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 溫州名創知識產權代理有限公司 33258
• 代理人: 曾建芳

本發明公開了一種用于測定D?二聚體含量的化學發光板的包被方法，其包括以下步驟：①制備包被過程中的使用液，該使用液包括包被液、清洗液、復合酶液、偶聯液、保護液，②選取聚苯乙烯微孔板，③聚苯乙烯微孔板的每孔加入50微升的偶聯液，室溫條件下孵育30min，用清洗液清洗3次，每次5min；④聚苯乙烯微孔板的每孔再加入100微升的包被液，偶聯過程中溫度條件為室溫，時間為1.5h，用清洗液清洗3次，每次5min；⑤再每孔加入50微升的保護液，低溫，風干。本發明的包被方法能夠準確地對D?二聚體的含量進行定量定性分析，該化學發光板的包被方法能夠提升檢測試劑盒的性能指標，使其具有較高的靈敏度，較寬的線性范圍等特點。

技術領域

本發明涉及D-二聚體含量檢測技術領域，尤其是一種用于測定D-二聚體含量的化學發光板的包被方法。

背景技術

目前，D-二聚體的含量檢測是深靜脈血栓，肺栓塞，彌漫性血管內凝血等疾病的關鍵指標。這些疾病會造成體內凝血系統或纖溶系統的激活，從而造成D-二聚體水平的升高，而且這種凝血系統或纖溶系統的激活與疾病的病期、嚴重程度、治療情況密切相關，因而在這些疾病中檢測D-二聚體的水平，可以作為疾病分期、判斷預后和指導治療的一項評判標志。

目前，應用較多的D-二聚體檢測方法主要有：酶聯免疫吸附試驗、乳膠顆粒凝集試驗、免疫過濾膠體金染色法、雙抗體RBC凝集法和放免法。臨床最常用的是：酶聯免疫吸附試驗、乳膠顆粒凝集試驗和免疫過濾膠體金染色法，其中乳膠顆粒凝集試驗法測定速度快，但敏感度不如酶聯免疫吸附試驗法；酶聯免疫吸附試驗法敏感度高，但檢測時耗時較長。

化學發光免疫分析是靈敏度較高的一種檢測技術，其具有標記物穩定性好，無污染，操作簡單等優點，該方法能夠很好的彌補上述其他方法的不足。包被抗體的化學發光板是化學發光免疫分析檢測試劑盒中重要的一部分，它是檢測D-二聚體含量的基體，對于該發光板包被的處理能夠反應該檢測試劑盒的性能指標。該檢測試劑盒的性能指標的準確度和靈敏度等性能的好壞，對于血清中D-二聚體含量的測定發揮重要的作用，能為臨床診斷、監測治療提供科學依據。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供了一種用于測定D-二聚體含量的化學發光板的包被方法，該化學發光板的包被方法能夠準確地對血清中D-二聚體的含量進行定量定性分析，該化學發光板的包被方法能夠提升檢測試劑盒的性能指標，使其具有較高的靈敏度，較寬的線性范圍等特點。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種測定D-二聚體含量中化學發光板的包被方法，其特征在于，包括以下步驟：①制備包被過程中的使用液，該使用液包括包被液、清洗液、復合酶液、偶聯液、保護液，所述包被液由15mM的pH＝7.4的磷酸鹽緩沖液、2.5ug/mL的D-二聚體抗體、質量分數為0.05％的Brij-35、質量分數為1.5％的蔗糖、質量分數為2％的甘油、質量分數為0.03％的PC-300組成；所述2.5ug/mL的D-二聚體抗體制備過程如下：選取D-二聚體抗體，加入50微升復合酶液，酶切過程中溫度條件為37℃，時間為2h；所述清洗液由15mM的pH＝7.4的磷酸鹽緩沖液、質量分數為0.03％的Tween-80組成；所述復合酶液是由胃蛋白酶和木瓜蛋白酶組成，胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的質量比例為0.5∶0.1；所述偶聯液采用2mM的N，N’-羰基二咪唑的醇溶液；所述保護液采用質量分數為60％的甘油-磷酸鹽緩沖液；

②選取材質為96孔白色不透明的聚苯乙烯微孔板，

③聚苯乙烯微孔板的每孔加入50微升的偶聯液，室溫條件下孵育30min，用清洗液清洗聚苯乙烯微孔板3次，每次5min；

④聚苯乙烯微孔板的每孔再加入100微升的包被液，偶聯過程中溫度條件為室溫，時間為1.5h，用清洗液清洗聚苯乙烯微孔板3次，每次5min；

⑤再在聚苯乙烯微孔板的每孔加入50微升的保護液，低溫，風干。