[發明專利]一種鐵皮石斛利用莖段薄片進行擴繁的方法

有效

• 申請號: 201710601234.5
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN107155898B
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 馬蕾;呂曉惠;董道峰;朱嬌;孔維國;泮海軍;張冀華
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 韓百翠

本發明公開了一種鐵皮石斛利用莖段薄片進行擴繁的方法。本發明首先將鐵皮石斛莖段切割成厚度0.2cm以上的莖段薄片，接種于接種培養基上不經歷愈傷組織階段直接分化獲得無菌苗，當無菌苗長至3?5片葉時，移植到增殖培養基上，可快速獲得大量無菌苗。利用該方法進行鐵皮石斛的組織培養擴繁，可節約從田間鐵皮石斛植株獲得無菌苗的時間，快速獲得大量遺傳背景一致的種苗群體，滿足商品苗對擴繁一致性、穩定性的要求。本發明采用莖段薄片0.2cm以上即可，不需要必須有節點，大大增加了外植體的獲取數量。

技術領域

本發明涉及一種鐵皮石斛擴繁方法，具體是利用莖段薄片不經歷愈傷組織階段直接分化獲得無菌苗，進而通過增殖獲得大量的無菌苗的擴繁方法，屬于農業領域。

背景技術

鐵皮石斛為蘭科石斛屬植物，是傳統名貴中藥材。近年來隨著人們對鐵皮石斛的了解越來越多，對鐵皮石斛的需求日趨增加，而石斛自然繁殖力極低，種子需與真菌共生才能萌發，加上長期采挖，稀缺的野生資源越來越少。通過組培方法可快速獲得鐵皮石斛的無菌苗，并通過快速增殖，可以快速獲得大量無菌鐵皮石斛種苗。

目前通過組培獲得鐵皮石斛無菌苗的方法有兩種：

一是果莢消毒后在培養基上播種獲得無菌苗，此方法獲得無菌植株為雜交后代，每個個體的基因型都存在差異，在商品化生產中無法滿足對種苗一致性的要求；

二是通過外植體消毒，經過愈傷組織培養、分化培養、增殖培養獲得遺傳背景穩定，變異系數小的大量無菌植株，此方法經歷愈傷組織培養、分化培養兩個階段，時間較長；并且，已報道的此類方法，需要選擇距離節左端和右端各0.5-1cm左右的莖段，同樣長度的外植體獲得的無菌苗數量較少。

因而，急需繼續尋找一種優良的鐵皮石斛組培快繁方法，既能快速獲得大量的無菌植株，又能保持遺傳性狀的穩定。

發明內容

本發明克服了上述現有技術的不足，提供了一種鐵皮石斛利用莖段薄片進行擴繁的方法。本發明首先將鐵皮石斛莖段切割成厚度0.2cm以上的莖段薄片，接種于接種培養基上不經歷愈傷組織階段直接分化獲得無菌苗，當無菌苗長至3-5片葉時，移植到增殖培養基上，可快速獲得大量無菌苗。利用該方法進行鐵皮石斛的組織培養擴繁，可節約從田間鐵皮石斛植株獲得無菌苗的時間，快速獲得大量遺傳背景一致的種苗群體，滿足商品苗對擴繁一致性、穩定性的要求。

本發明的技術方案：一種鐵皮石斛利用莖段薄片擴繁的方法,其特征是,

1)培養基制備

接種培養基為：MS+6-BA 0.125-0.25mg/L+NAA 0.125-0.375mg/L+2,4-D 0.5-1.5mg/L+KT 0.125-0.25mg/L；

增殖培養基為：蒸餾水+花寶1號1.4-1.6g/L+花寶2號0.30-0.35g/L+牛骨蛋白胨1.5-1.6g/L+活性炭1.5-1.6g/L+MS母液中的6、7部分各10-12ml/L+蔗糖18-20g/L+瓊脂粉5.5-6.0g/L+香蕉泥100-120g；

2)外植體預處理與接種培養

采用健康鐵皮石斛的莖段作為外植體，將外植體洗滌、滅菌后將莖段橫切為厚度0.2cm以上的莖段薄片，然后接種于接種培養基上光培養25±2天，即可見到芽，繼續光培養使石斛在組培瓶內生長，至55天左右時，無菌苗可長出3-5片葉，可進行增殖；

3)無菌苗接種

當無菌苗長出3-5片葉時，將無菌苗移植到裝有增殖培養基的組織培養瓶中，光培養15-25天，每棵無菌苗可分生出20-30棵小苗；

4)壯苗培養、生根培養和出瓶煉苗