[發(fā)明專利]一種鐵皮石斛利用莖段薄片進(jìn)行擴(kuò)繁的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710601234.5 | 申請(qǐng)日： | 2017-07-21 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN107155898B | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-04-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 馬蕾;呂曉惠;董道峰;朱嬌;孔維國(guó);泮海軍;張冀華 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所 |
| 主分類號(hào)： | A01H4/00 | 分類號(hào)： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 濟(jì)南誠(chéng)智商標(biāo)專利事務(wù)所有限公司 37105 | 代理人： | 韓百翠 |
| 地址： | 250100 山東*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 鐵皮 石斛 利用 薄片 進(jìn)行 方法 | ||
1.一種鐵皮石斛利用莖段薄片擴(kuò)繁的方法，其特征是，
1)培養(yǎng)基制備
接種培養(yǎng)基為：MS+6-BA 0.125-0.25mg/L+NAA 0.125-0.375mg/L+2，4-D 0.5-1.5mg/L+KT 0.125-0.25mg/L；
增殖培養(yǎng)基為：蒸餾水+花寶1號(hào)1.4-1.6g/L+花寶2號(hào)0.30-0.35g/L+牛骨蛋白胨1.5-1.6g/L+活性炭1.5-1.6g/L+MS母液中的6、7部分各10-12ml/L+蔗糖18-20g/L+瓊脂粉5.5-6.0g/L+香蕉泥100-120g/L；
所述MS母液中的6部分為：硼酸0.62g/L，硫酸錳1.86g/L，硫酸鋅0.86g/L，碘化鉀0.083g/L，鉬酸鈉0.025g/L，硫酸銅0.0125g/L，氯化鈷0.0125g/L；
所述MS母液中的7部分為：肌醇10g/L，甘氨酸0.2g/L，煙酸0.05g/L，鹽酸吡哆辛0.03g/L，鹽酸硫胺素0.02g/L；
2)外植體預(yù)處理與接種培養(yǎng)
采用健康鐵皮石斛的莖段作為外植體，將外植體洗滌、滅菌后將莖段橫切為厚度0.2cm以上的莖段薄片，然后接種于接種培養(yǎng)基上光培養(yǎng)25±2天，外植體上生芽，繼續(xù)光培養(yǎng)至無(wú)菌苗長(zhǎng)出3-5片葉時(shí)進(jìn)行增殖；
3)無(wú)菌苗接種
當(dāng)無(wú)菌苗長(zhǎng)出3-5片葉時(shí)，將無(wú)菌苗移植到裝有增殖培養(yǎng)基的組織培養(yǎng)瓶中，光培養(yǎng)15-25天，每棵無(wú)菌苗分生出20-30棵小苗；
4)壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和出瓶煉苗
將增殖的鐵皮石斛苗經(jīng)壯苗培養(yǎng)和生根培養(yǎng)后；選取根系發(fā)達(dá)及健壯的鐵皮石斛放在溫室馴化2-3天；清洗干凈根部的培養(yǎng)基，移栽至已澆透水的樹(shù)皮基質(zhì)中繼續(xù)培養(yǎng)至植株長(zhǎng)大。
2.如權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛利用莖段薄片擴(kuò)繁的方法，其特征是，所述步驟2)的滅菌為：用75％酒精滅菌30s，后用無(wú)菌水沖洗1次；用0.1％升汞溶液滅菌8min，用無(wú)菌水沖洗3次。
3.如權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛利用莖段薄片擴(kuò)繁的方法，其特征是，所述步驟4)的壯苗培養(yǎng)為：將增殖的鐵皮石斛苗轉(zhuǎn)接到壯苗培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為1500-1800lux，培養(yǎng)8-15d；所述壯苗培養(yǎng)基為：MS+IBA0.3mg/L+NAA0.4mg/L+2，4-D0.7mg/L+活性炭5g/L+瓊脂30g/L+香蕉泥20g/L，pH值為5.0-5.5。
4.如權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛利用莖段薄片擴(kuò)繁的方法，其特征是，所述步驟4)的生根培養(yǎng)為：于生根培養(yǎng)基上光照強(qiáng)度為2500-4500lx下培養(yǎng)3-8天；生根培養(yǎng)基為：MS+IBA3mg/L+NAA 1mg/L+2，4-D 0.2mg/L+活性炭10g/L+瓊脂30g/L+香蕉泥20g/L。
5.如權(quán)利要求1所述的一種鐵皮石斛利用莖段薄片擴(kuò)繁的方法，其特征是，所述步驟3)的組織培養(yǎng)瓶一瓶接種3-4棵石斛無(wú)菌苗。
6.如權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的一種鐵皮石斛利用莖段薄片擴(kuò)繁的方法，其特征是，所述步驟1)的接種培養(yǎng)基為：MS+6-BA 0.125mg/L+NAA 0.125mg/L+2，4-D 0.5mg/L+KT0.125mg/L。
7.如權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的一種鐵皮石斛利用莖段薄片擴(kuò)繁的方法，其特征是，所述步驟1)的增殖培養(yǎng)基為：蒸餾水+花寶1號(hào)1.4g/L+花寶2號(hào)0.30g/L+牛骨蛋白胨1.5g/L+活性炭1.5g/L+MS母液中的6、7部分各取10ml/L+蔗糖18g/L+瓊脂粉5.5g/L+香蕉泥100g/L。
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