[發明專利]RSV-PCV疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201710599996.6
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN107233567B
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 吳克;艾智武;閆利明;陳煜
• 申請（專利權）人: 武漢博沃生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/09;A61K39/155;A61K39/385;A61P31/04;A61P31/14;C07K14/135;C07K19/00;C12N15/74;C12N15/70
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 熊嫻;馮子玲

本發明公開了一種RSV?PCV疫苗及其制備方法，包括：RSV(呼吸道合胞病毒)免疫中間體，所述RSV免疫中間體的抗原為可引起機體免疫反應的RSV膜表面融合蛋白F和/或附著蛋白G，其中表達蛋白抗原的核酸序列重組在核酸載體上，重組蛋白的核酸序列以減毒胞內細菌為細菌載體；PCV(肺炎球菌)免疫中間體，所述PCV免疫中間體包括肺炎球菌多糖抗原及蛋白載體，其中蛋白載體為重組蛋白載體，由大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)蛋白及霍亂弧菌腸毒素B亞單位蛋白(CTB)重組獲得，LTB核酸序列與CTB核酸序列通過引物序列橋接，編碼的載體蛋白序列如序列表SEQ ID NO：8所示；上述組分的免疫中間體分別制備，臨用混合。

技術領域

本發明涉及一種RSV-PCV疫苗及其制備方法，屬于生物技術領域。

背景技術

一、呼吸道合胞病毒及其流行病學

呼吸道傳染病至今仍然是世界上導致死亡的主要原因之一，而流感病毒(Influenza virus，FLU)和呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)則是重要的呼吸道病原體。目前，流感已有安全有效的不同類型疫苗，為流感的防控提供了保證。而RSV由于自身免疫特性，投入臨床的疫苗很少，為其防控提出了挑戰。至今僅有美國MedImmune公司研制生產的流感三價減毒活疫苗通過FDA審批。RSV是嬰幼兒下呼吸道感染最重要的病原，也是造成老年人和免疫缺陷成人住院和肺炎死亡的重要原因。據統計，6個月以內的嬰幼兒因RSV感染導致住院達70％，2周歲以內的兒童甚至高達99％。RSV因其致病范圍廣，病情高發，且會引起嚴重的并發癥等，給人類健康和生命安全造成了嚴重威脅。世界衛生組織已將RSV疫苗定為優先發展的疫苗之一。

RSV屬副粘病毒科肺病毒屬，是非節段性單股負鏈RNA病毒，含A、B兩個血清型。RSV基因組全長約15Kb，編碼10種主要蛋白，分別由三個跨膜蛋白(G、F和SH)、兩個基質蛋白(M和M2)、三個核衣殼蛋白(N、P和L)及兩個非結構蛋白(NS1和NS2)構成，其中融合蛋白F(Fusion protein，F)和附著蛋白G(Attchment protein，G)是RSV激發機體產生保護性抗體最重要的病毒蛋白。G蛋白高度變異，并非感染和細胞融合所必須的；的F蛋白高度保守，介導病毒包膜和宿主細胞膜的融合，使得病毒成功入侵宿主細胞并且還可引起相鄰細胞質膜間的融合促進體外合胞體的形成。針對RSV F和G糖蛋白的全身性中和抗體能有效防止RSV再感染，因此RSV F和G蛋白已作為公認的保護性抗原和毒力致病分子。

對于RSV而言，20世紀60年代，Fulginiti VA等研制的福爾馬林滅活疫苗(FI-RSV)由于誘發Th2型免疫過激導致2名兒童死亡和80％住院，以失敗告終。目前RSV疫苗的研究主要集中在載體疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗、DNA疫苗、VLP疫苗，已有多種疫苗類型正在研制，但至今無獲批的RSV疫苗可用。RSV疫苗的研究一直是國際社會關注的焦點，從已有的研制中的RSV疫苗可見，注射免疫不能產生有效的粘膜和細胞免疫反應且免疫保護效果受限、DNA疫苗存在潛在安全性以及全長F、G蛋白疫苗存在潛在Th1/Th2失平衡等瓶頸問題亟待解決。阻礙RSV疫苗研制的主要障礙有以下幾點：一是大多數動物模型包括黑猩猩等均為半許可感染/復制模型，因此難以完全再現RSV的致病性；二是作為疫苗主要目標人群的新生兒免疫系統發育不成熟，同時體內存在的母傳抗體能介導免疫干擾；三是RSV存在兩種不同抗原亞型，而且自然感染難以產生有效的免疫保護作用；四是福爾馬林滅活疫苗(FI-RSV)不僅不能防止嬰幼兒感染，在嗣后的自然感染中，接種疫苗的兒童病情加重(即疾病增強作用)、甚至死亡。

近年來的研究表明，以載體為基礎構建的RSV活載體疫苗是目前有望用于新生兒的RSV候選疫苗RSV。活載體疫苗的種類主要包括病毒載體疫苗和細菌載體疫苗。RSV病毒載體疫苗主要包括：痘苗病毒(vaccinia virus)載體疫苗、腺病毒(adenovirus，Ad)載體及副黏病毒(paramyxovirus)載體疫苗等，近年來，腺病毒載體疫苗和副黏病毒載體疫苗受到廣泛關注。

二、肺炎球菌及其流行病學