[發(fā)明專利]一種液體酶制劑及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710599690.0
• 申請日: 2016-02-16
• 公開（公告）號(hào): CN107326019B
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王方明;謝永強(qiáng);徐保弟;張宇
• 申請（專利權(quán)）人: 上海青瑞食品科技有限公司;濟(jì)南青瑞生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N9/96
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種液體酶制劑及制備方法，具體涉及到一種可常溫存儲(chǔ)、性狀穩(wěn)定、酶活保存率超過80％的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(EC.2.3.2.13)液體制劑及制備方法，屬于酶制劑領(lǐng)域和食品添加劑領(lǐng)域。

背景技術(shù)

谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(EC.2.3.2.13，英文全稱Amineγ-glutamyl-transferase，英文簡稱Transglutaminase，縮寫名為TG)是一種蛋白交聯(lián)酶，能以蛋白質(zhì)肽鏈中賴氨酸的ε-氨基為酰基受體，催化蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間形成ε-(γ-谷氨?；?賴氨酸的異型肽鍵，改善蛋白質(zhì)的乳化性、流變性、溶解性、起泡性等多種性質(zhì)，賦予蛋白質(zhì)特有的質(zhì)構(gòu)特性和粘合性，提高產(chǎn)品的色香味，具有很大的市場價(jià)值。

谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶最早是由Clarke等人從豚鼠肝臟中分離得到。1989年由日本Amano公司的Ando等人發(fā)明了微生物發(fā)酵法生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶，1997年由日本味之素公司實(shí)現(xiàn)了商業(yè)規(guī)?；a(chǎn)，2001年我國將谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶正式列為食品添加劑。目前全球范圍內(nèi)主要發(fā)酵生產(chǎn)廠家為日本味之素公司，谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)品品牌為Acvita，國內(nèi)主要生產(chǎn)企業(yè)有上海青瑞食品科技有限公司，濟(jì)南青瑞生物科技有限公司、泰興市東圣食品科技有限公司、泰興市一鳴生物制品有限公司、河南仰韶生化工程有限公司等企業(yè)，產(chǎn)品為固體粉末型酶制劑，并由上海青瑞食品科技有限公司率先使用立體真空包裝，日本味之素公司至今采用粉末充氮包裝。

目前谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶粉末制劑雖然已經(jīng)實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，并在食品加工行業(yè)獲得廣泛應(yīng)用。但在生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯存、應(yīng)用中還存在很多問題：

1)生產(chǎn)成本：由于在谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)過程過程中，首先獲得的發(fā)酵液體，酶液精制過程中，需要沉淀，干燥，粉碎等加工步驟，工序繁雜，導(dǎo)致生產(chǎn)成本上升；

2)安全防護(hù)：在生產(chǎn)和使用過程中谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶粉末制劑，容易擴(kuò)散，導(dǎo)致車間環(huán)境變惡劣，設(shè)備難以清洗；操作空間充斥粉塵，防護(hù)困難，酶粉末被人體吸入后，引發(fā)強(qiáng)烈過敏性反應(yīng)，嚴(yán)重?fù)p害操作人員的呼吸道器官，出現(xiàn)高燒、肺炎、休克等癥狀，對操作人員健康產(chǎn)生很大危害，目前為止，工廠里已經(jīng)多次發(fā)生谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶引起咳嗽、發(fā)燒等過敏變態(tài)反應(yīng)癥狀的事件；

3)包裝問題：谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶粉末酶制劑采用真空包裝，在抽真空時(shí)粉末容易吸入設(shè)備，造成一定損失；如果酶制劑包裝封口不嚴(yán)，產(chǎn)生漏氣現(xiàn)象，則容易發(fā)生吸潮、結(jié)塊、酶活降低等現(xiàn)象，若采用充氮包裝，由于充氮操作繁瑣并導(dǎo)致大量揚(yáng)塵，且生產(chǎn)成本大幅增加；

4)應(yīng)用方面：眾所周知，谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶只有在水中溶解狀態(tài)才能發(fā)揮作用。在生產(chǎn)應(yīng)用中，粉末制劑存在二次溶解過程，大大減少了酶發(fā)揮作用的時(shí)間。并且經(jīng)常出現(xiàn)加水沒完全溶解的現(xiàn)象或者直接添加粉末容易出現(xiàn)分布不均勻，同時(shí)使用設(shè)備進(jìn)行滾揉操作時(shí)，容易黏連到設(shè)備上，導(dǎo)致粉末制劑利用率降低、應(yīng)用效果差，從而不得不增加谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶粉末制劑用量；

5)酶制劑發(fā)展趨勢：在生物酶制劑及各工業(yè)領(lǐng)域，已經(jīng)有很多類型酶制劑采用了液體劑型，并解決了保存、運(yùn)輸以及應(yīng)用過程中存在問題，實(shí)現(xiàn)了經(jīng)濟(jì)化綠色化生產(chǎn)和使用，如液體纖維素酶(專利公開號(hào)：CN103981168A、CN101381716)、液體植酸酶(專利公開號(hào)：CN101617740)、液體果膠酶(專利公開號(hào)：CN104531653A)、液體脂肪酶(專利公開號(hào)：CN103525797A)等，但目前在全球范圍內(nèi)尚未有商業(yè)化的常溫長期穩(wěn)定儲(chǔ)存的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的液體制劑。

專利公開號(hào)CN 104024406A提供了一種谷氨酰轉(zhuǎn)氨酶的液體酶制劑的制造方法，鑒于該方法為低溫下最長保存期180天，且需要在冷凍的條件下儲(chǔ)運(yùn)，限制了該方法商業(yè)化使用，至今未見應(yīng)用此方法制造的成品。開發(fā)一種可在常溫條件(25℃，下同)下穩(wěn)定的液體谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶穩(wěn)定酶制劑成為當(dāng)前食品工業(yè)急需解決的課題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(EC2.3.2.13)的液體制劑，其可以在常溫下保存6個(gè)月，酶活保存率80％以上。

本發(fā)明的目的之二是提供一種谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(EC2.3.2.13)的液體制劑的制備方法，該法制備得到的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶液體制劑具有良好穩(wěn)定性，可以在常溫下保存6個(gè)月，酶活保存率80％以上。

本發(fā)明主要解決谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶液體制劑在常溫下難保存的技術(shù)問題，可滿足商業(yè)化生產(chǎn)和使用要求。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，需要先用實(shí)驗(yàn)和理論闡述發(fā)明技術(shù)方案，隨后總結(jié)并給出本發(fā)明的技術(shù)方案，具體如下：