[發(fā)明專利]四病原體同步檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用和制備

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710599151.7
• 申請(qǐng)日: 2017-07-21
• 公開（公告）號(hào): CN107202889B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李會(huì)娜;付昕;張必新;牛莉娜;郭蘭英;葉成果;王奕江;劉勁林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州華益美生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/576
• 分類號(hào): G01N33/576;G01N33/571;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/544;G01N21/76
• 代理公司: 北京萬(wàn)科園知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11230
• 代理人: 張亞軍;夏新

本發(fā)明提供了同時(shí)檢測(cè)樣品中HBV、HCV、HIV以及TP等四種病原體的免疫檢測(cè)試劑盒，其包括：用各病原體的抗原或抗體標(biāo)記的磁微粒、與各病原體的抗原或抗體偶聯(lián)的吖啶酯、陰性對(duì)照和各陽(yáng)性對(duì)照。本發(fā)明還提供了該試劑盒的應(yīng)用和制備方法等。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和梅毒螺旋體(TP)等四種病原體的檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用和制備方法等。

背景技術(shù)

乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人免疫缺陷病毒(HIV)和梅毒螺旋體(TP)均為國(guó)家規(guī)定的重大傳染性疾病，流行的范圍廣，嚴(yán)重影響人民的身體健康。其中，尤其是HIV，國(guó)際醫(yī)學(xué)界至今尚無(wú)防治艾滋病的有效疫苗、藥物和療法，自1985年在中國(guó)境內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)艾滋病病例報(bào)告數(shù)以來(lái)，我國(guó)艾滋病病例報(bào)告數(shù)平均以每年30％-40％的速度增加。

除了傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)檢查外，早期對(duì)這四種病原體的免疫學(xué)聯(lián)合檢測(cè)方法操作較為繁瑣，過(guò)程不容易標(biāo)準(zhǔn)化，檢測(cè)靈敏度低，尤其是特別容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果。所以近年來(lái)，對(duì)這四種病原體的檢測(cè)逐漸傾向于用基于核酸的PCR法來(lái)檢測(cè)，例如，中國(guó)專利申請(qǐng)CN101487062A公開了一種同步檢測(cè)肝炎、艾滋病毒和梅毒螺旋體核酸的試劑盒，其采用一步法單管單酶多項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的TaqMan PCR擴(kuò)增體系；又如，中國(guó)專利申請(qǐng)CN102230032A公開了一種病原體核酸的等溫鏈置換多重檢測(cè)卡，可以多重檢測(cè)HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA和TP DNA，其采用等溫鏈置換來(lái)進(jìn)行多重檢測(cè)。

然而，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，由于PCR的靈敏度太高，而檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室難免不受各種檢測(cè)樣品的污染，即使進(jìn)行消毒，也很難完全去除各病原體的病毒核酸片段，因此造成不少假陽(yáng)性結(jié)果，容易引起糾紛。

近年來(lái)，對(duì)這四種病原體的免疫學(xué)聯(lián)合檢測(cè)方法也有所發(fā)展，但是主要使得過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化，然而檢測(cè)靈敏度，尤其是結(jié)果準(zhǔn)確性方面，改進(jìn)不大。例如，中國(guó)專利申請(qǐng)CN102023216A公開了一種對(duì)乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病原體進(jìn)行共檢的懸浮芯片，可快捷地同時(shí)檢測(cè)待檢樣品中的乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病原體，然而本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，其檢測(cè)準(zhǔn)確性還有待進(jìn)一步提高，尤其是其容易造成 HIV檢測(cè)假陰性結(jié)果，而這樣的結(jié)果是比假陽(yáng)性結(jié)果危害大得多的，因此至今未推廣使用。而中國(guó)專利申請(qǐng)CN101373187A公開了一種通過(guò)單次實(shí)驗(yàn)即可實(shí)現(xiàn)艾滋、乙肝、丙肝、梅毒這四種重大傳染病中的三到四項(xiàng)同時(shí)篩查的免疫層析試劑盒，其基于膠體金，所以這種試劑盒檢測(cè)靈敏度不高，而且混合劃線時(shí)也無(wú)法避免HIV檢測(cè)的假陰性結(jié)果。

為此，本發(fā)明人憑借長(zhǎng)期在本領(lǐng)域深耕的經(jīng)驗(yàn)，在經(jīng)歷大量實(shí)驗(yàn)失敗的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)要開發(fā)乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒和梅毒螺旋體同時(shí)適用的高靈敏度、高精確度、高可靠性并且檢測(cè)方便迅速的免疫分析方法，需用多方面的協(xié)同改進(jìn)，包括抗原或抗體的設(shè)計(jì)或選擇，抗原或抗體載體的選擇，顯示(發(fā)光)標(biāo)記物的制備，以及陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照等。本發(fā)明人最終開發(fā)出了同步檢測(cè)乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒和梅毒螺旋體的檢測(cè)試劑盒，其不但靈敏度高、可靠性好，不易受人為操作因素影響，尤其是能夠避免HIV的假陰性檢測(cè)結(jié)果的出現(xiàn)，而且操作方便迅速，操作便于標(biāo)準(zhǔn)化，可用于急診檢測(cè)等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種HBV、HCV、HIV和TP同時(shí)適用的高靈敏度、高精確度、高可靠性并且檢測(cè)方便迅速的同步檢測(cè)試劑盒及其免疫分析HBV抗原、HCV抗體、HIV抗原和抗體以及TP抗體中的應(yīng)用和其中試劑的制備方法等。

具體而言，在第一方面，本發(fā)明提供了同時(shí)檢測(cè)樣品中HBV抗原、HCV抗體、HIV抗原和抗體以及TP抗體的免疫檢測(cè)試劑盒，其包括：

(1.1)第1.1容器，其中容納用HBsAg抗體標(biāo)記的磁微粒；

(1.2)第1.2容器，其中容納用HCV抗原標(biāo)記的磁微粒；