[發明專利]一種懸鉤子屬植物總RNA的快速提取方法

在審

• 申請號: 201710596513.7
• 申請日: 2017-07-20
• 公開（公告）號: CN109280661A
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發明（設計）人: 周琪
• 申請（專利權）人: 周琪
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種懸鉤子屬植物總RNA的快速提取方法，其特征在于：它包括以下操作步驟：

1)取2ml離心管，向離心管中加入700～1000μl去糖緩沖液，并加入5～15μlβ-巰基乙醇，于-20℃預冷5～10min；

2)取新鮮植物材料或經液氮速凍后-80℃保存的植物材料0.1～0.15g，加入0.1g交聯聚乙烯基吡咯烷酮，在液氮冷凍條件下研磨成粉狀，迅速轉移至步驟1)的離心管中，溫柔上下顛倒混勻后于冰上靜置10min；

3)在4℃下按照3200×g離心5～10min；

4)徹底去除步驟3)離心所得上清液，向沉淀中加入700～1000μl65℃預熱的細胞裂解液，渦旋1min，于55～65℃保溫20～30min；

5)待步驟4)中的混合液冷卻至室溫后，按順序加入細胞裂解液等體積的水飽和酚，1/80-1/50裂解液體積的pH調節劑，1/5裂解緩沖液體積的氯仿，劇烈震蕩2min；

6)在4℃下按照16000×g離心5～10min；

7)將步驟6)離心所得上清液轉入另一離心管，向管中加入上適量核酸沉淀劑，于-20℃靜置30min以上，在4℃下按照16000×g離心10min后棄上清液，保留沉淀；

8)將步驟7)離心所得沉淀用體積分數為70～75％乙醇洗滌后室溫風干，用DEPC處理水溶解后-80℃保存。

2.根據權利要求1所述懸鉤子屬植物總RNA的快速提取方法，其特征在于：所述去糖緩沖液為：0.05M氯化鈉、50mM pH 8.0的乙二胺四乙酸二鈉、200mM pH 8.0的三羥甲基氨基甲烷。

3.根據權利要求1所述懸鉤子屬植物總RNA的快速提取方法，其特征在于：使用堿性細胞裂解液裂解細胞，所述細胞裂解液為：30g/L十六烷基三甲基溴化銨、1.4M氯化鈉、50～100mM pH 8.0的乙二胺四乙酸二鈉、100～200mM pH 8.0的三羥甲基氨基甲烷以及20g/L聚乙烯吡咯烷酮 K30。

4.根據權利要求1所述懸鉤子屬植物總RNA的快速提取方法，其特征在于：在細胞徹底裂解后，再使用pH調節劑調節混合液pH，使用的pH調節劑包括但不限于弱酸如冰醋酸、草酸。

5.根據權利要求1所述懸鉤子屬植物總RNA的快速提取方法，其特征在于：使用的核酸沉淀劑包括但不 限于無水乙醇、異丙醇。

6.根據權利要求1所述懸鉤子屬植物總RNA的快速提取方法，其特征在于：核酸沉淀時，使用的無水乙醇體積為上清體積的2～2.5倍；使用異丙醇體積為上清體積的0.8～1倍。

7.根據權利要求1所述懸鉤子屬植物總RNA的快速提取方法，其特征在于：其適用于懸鉤子屬下的樹莓、黑莓以及其他種或變種。

8.根據權利要求1所述懸鉤子屬植物總RNA的快速提取方法，其特征在于：其中植物材料包括但不限于果實、葉片及花。