[發明專利]一種免洗滌圖像類流式熒光檢測方法和系統

有效

• 申請號: 201710595562.9
• 申請日: 2017-07-20
• 公開（公告）號: CN107367456B
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 顏海波;羅浦文
• 申請（專利權）人: 上海睿鈺生物科技有限公司
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14;G01N21/64
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 王寶筠

1.一種免洗滌圖像類流式熒光檢測方法，其特征在于，包括：

采用預設的目標熒光染料和染色方法對目標樣品進行染色，確保染色孵育后形成一定的游離熒光染料，以使得目標樣品中的所有細胞，包括經過洗滌后無法在電荷耦合元件下形成熒光成像的弱熒光陰性細胞，在圖像類流式熒光檢測系統下采集到用于密度函數聚類分辨分析的熒光強度值；

基于顯微成像系統獲取染色后的目標樣品的顯微熒光圖像；

采用計算機圖像識別技術提取目標樣品的灰度值和像素值；

基于所述目標樣品的灰度值和像素值計算所述目標樣品的熒光強度值，并輸出所述目標樣品的顯微熒光圖像和密度函數聚類分析的結果；

采用預設的目標熒光染料對目標樣品進行染色之前，還包括：

判斷是否滿足條件3A>B+C*D>A，即(3A-B)/C>D>(A-B)/C，如果是，則確定需要添加的目標熒光染料的染料濃度范圍為(A-B)/C*X到(3A-B)/C*X之間任意一濃度值；

其中，A為顯微成像系統的熒光成像靈敏度下限值，B為目標樣品中細胞自發熒光強度，C為單個細胞非特異吸附染料單位量，D為單位濃度染料發出的熒光強度，X為反應體系中細胞的個數；

采用預設的目標熒光染料對目標樣品進行染色之前，還包括：

確定反映體積Y，依據反映體積Y計算得到所需添加的目標熒光染料的體積，所述Y為目標樣品反應物的體積。

2.根據權利要求1所述的免洗滌圖像類流式熒光檢測方法，其特征在于，所述采用計算機圖像識別技術提取目標樣品的灰度值和像素值之前，還包括：

對顯微熒光圖像中每個檢測目標的顯微熒光圖像區域進行邊緣提取和分割，得到目標樣品中的各個細胞的顯微熒光圖像區域。

3.根據權利要求2所述的免洗滌圖像類流式熒光檢測方法，其特征在于，對顯微熒光圖像中每個檢測目標的顯微熒光圖像區域進行邊緣提取和分割，包括：

對顯微熒光圖像進行高斯平滑濾波；

對平滑濾波后的顯微熒光圖像進行梯度邊緣檢測；

依據梯度邊緣檢測的檢測結果對所述顯微熒光圖像進行熒光目標前景提取；

依據提取到的目標前景對所述顯微熒光圖像進行單個熒光區域的分割，得到每個細胞的顯微熒光圖像區域。

4.根據權利要求3所述的免洗滌圖像類流式熒光檢測方法，其特征在于，

對顯微熒光圖像進行高斯平滑濾波之前還包括：

采用顯微熒光成像系統采集得到目標樣品的明場圖像；

對明場圖像中的明場目標進行識別，并且對識別出的明場目標中的團塊區域進行分離，得到明場圖像中每個檢測目標的位置、尺寸信息；

對顯微熒光圖像進行識別，判斷所述顯微熒光圖像中對應明場圖像中各個檢測目標的位置、尺寸信息的區域是否為空，如果否，采用得到的明場圖像中每個檢測目標的位置、尺寸信息相對應的區域，由所述顯微熒光圖像中確定對應的每個檢測目標的顯微熒光圖像區域；

如果所述顯微熒光圖像中對應明場圖像中檢測目標的位置、尺寸信息的區域為空，對顯微熒光圖像進行高斯平滑濾波并執行后續操作。

5.根據權利要求1所述的免洗滌圖像類流式熒光檢測方法，其特征在于，對所述顯微熒光圖像進行聚類分析，包括：

對所述顯微熒光圖像中各個細胞的顯微熒光圖像區域內的熒光強度值進行計算。

6.根據權利要求5所述的免洗滌圖像類流式熒光檢測方法，其特征在于，對所述顯微熒光圖像進行聚類分析還包括：根據單通道或多通道對應的各個細胞顯微熒光圖像區域的熒光強度值的大小對細胞進行分類。