[發明專利]一種重組畢赤酵母工程菌、全細胞催化劑及萊鮑迪苷A的合成方法

在審

• 申請號: 201710589035.7
• 申請日: 2017-07-19
• 公開（公告）號: CN107267406A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 林影;梁書利;毛國紅;陳美琪
• 申請（專利權）人: 廣州康琳奈生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12P19/56;C12R1/84
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司44202
• 代理人: 王會龍

1.一種重組畢赤酵母工程菌，其特征在于，所述重組畢赤酵母工程菌是通過將含有如下外源DNA序列的表達載體轉化到畢赤酵母而獲得：

所述外源DNA為編碼蔗糖合成酶Sus1的DNA序列，所述蔗糖合成酶Sus1的氨基酸序列如Seq No.1所示。

2.如權利要求1所述的重組畢赤酵母工程菌，其特征在于：所述外源DNA序列如Seq No.2所示。

3.如權利要求2所述的重組畢赤酵母工程菌，其特征在于：所述表達載體為將所述外源DNA克隆至巴斯德畢赤酵母表達載體pPICZA，得到的胞內表達載體pPICZA-Sus1。

4.如權利要求3所述的重組畢赤酵母工程菌，其特征在于：所述重組畢赤酵母工程菌是所述胞內表達載體pPICZA-Sus1線性化后轉化到巴斯德畢赤酵母而得。

5.一種全細胞催化劑，其特征在于：包括如權利要求1-4中任意一項所述的重組畢赤酵母工程菌。

6.如權利要求5所述的全細胞催化劑，其特征在于，所述全細胞催化劑是通過如下步驟制備而成：

挑取重組畢赤酵母工程菌接種到BMGY培養基，30℃，250rpm培養至OD600接近6.0，于6000rpm,4℃離心5min收集細胞，然后將收集的細胞重懸到BMMY培養基至起始OD600接近1.0，于30℃，250rpm震蕩培養，每天補加終濃度1％甲醇；發酵3天后在6000rpm，4℃離心5min回收菌體；凍干后即為重組畢赤酵母全細胞催化劑。

7.一種萊鮑迪苷A的合成方法，其特征在于：該方法以蔗糖、二磷酸尿苷、甜菊苷為原料，以權利要求5或6中所述的全細胞催化劑為催化劑合成萊鮑迪苷A。

8.如權利要求7所述的萊鮑迪苷A的合成方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)按如下組分及其濃度制備反應體系；

50mM PBS緩沖液，

3mM MgCl₂，

50mM蔗糖，

1mM UDP，

10mg/mL甜菊苷；

(2)加入菌體量為30OD重組畢赤酵母與30OD菌體量的全細胞催化劑，于37℃進行反應，反應12h后停止反應；

(3)將反應液稀釋5倍后，用0.2um水系尼龍膜過濾后用液相色譜檢測RA的合成。