[發(fā)明專利]基于ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710587759.8 | 申請日： | 2017-07-18 |
| 公開（公告）號： | CN107227367A | 公開（公告）日： | 2017-10-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉育辰;郝杰;劉剛;李悅;袁思文;金文淵 | 申請（專利權(quán)）人： | 貴陽中醫(yī)學(xué)院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京聯(lián)創(chuàng)佳為專利事務(wù)所(普通合伙)11362 | 代理人： | 郭防,石誠 |
| 地址： | 550025 貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 基于 its2 序列 藥用 甘草 親緣 關(guān)系 鑒定 方法 | ||
1.基于ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法，其特征在于：包括對藥用甘草及其近緣種樣品親緣關(guān)系的鑒定。
2.如權(quán)利要求1所述的ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法，其特征在于：所述的對藥用甘草及其近緣種樣品親緣關(guān)系的鑒定；包括DNA提取、PCR擴(kuò)增、測序和確定甘草親緣關(guān)系。
3.如權(quán)利要求2所述的ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法，其特征在于：所述的DNA提取；是取甘草樣本組織，用酒精擦拭表面后晾干，用植物基因組DNA提取試劑盒提取總DNA，提取過程中水浴時(shí)間為50-70min，將總DNA稀釋至8-12ng·μL-1，-22℃--18℃下保存。
4.如權(quán)利要求2所述的ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法，其特征在于：所述的PCR擴(kuò)增；是以正向引物和反向引物進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，得擴(kuò)增產(chǎn)物；所述的測序；是將擴(kuò)增產(chǎn)物純化后，對其進(jìn)行雙向測序。
5.如權(quán)利要求4所述的ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法，其特征在于：所述的正向引物；是ATG CGA TAC TTG GTG TGA AT。
6.如權(quán)利要求4所述的ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法，其特征在于：所述的反向引物；是GAC GCT TCT CCA GAC TAC AAT。
7.如權(quán)利要求4所述的ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法，其特征在于：所述的擴(kuò)增反應(yīng)；是擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃5min；94℃30s，56℃30s，72℃45s，40cycles；72℃10min；擴(kuò)增反應(yīng)體系為：2×Power Taq PCR MasterMix 12.5μL，正、反向引物各1.0μL，總DNA3.0μL，加ddH2O至25.0μL。
8.如權(quán)利要求4所述的ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法，其特征在于：所述的正向引物濃度均為2.5μmol·L-1；所述的反向引物濃度均為2.5μmol·L-1。
9.如權(quán)利要求4所述的ITS2序列的藥用甘草親緣關(guān)系鑒定方法，其特征在于：所述的確定甘草親緣關(guān)系；是根據(jù)測序的結(jié)果統(tǒng)計(jì)其單倍型序列變異位點(diǎn)，然后與下表進(jìn)行比對，確定親緣關(guān)系；
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