[發明專利]一種納豆菌培養基及其優化方法

有效

• 申請號: 201710586418.9
• 申請日: 2017-07-18
• 公開（公告）號: CN107129956B
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 王國棟;劉書梅;杜磊
• 申請（專利權）人: 安陽工學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 北京權智天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11638
• 代理人: 王新愛

1.一種納豆菌培養基，其特征在于，所述培養基成分為：4％蔗糖、3％酵母浸粉、5％菠蘿皮汁、0.2％MgSO₄、0.1％K₂HPO₄、0.2％KH₂PO₄；

所述菠蘿皮汁的制作方法為：取200g鮮菠蘿皮，切碎后加入等量的水，打漿并煮沸20min后，進行冷卻、過濾，取濾液并定容到200mL。

2.根據權利要求1所述的納豆菌培養基的優化方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)制備基礎培養基：采用葡萄糖3％、蛋白胨2％、MgSO₄ 0.2％、K₂HPO₄ 0.1％、KH₂PO₄0.2％作為活化和傳代培養基；

2)制備納豆菌的液體種子培養基：在錐形瓶中裝入150mL上述基礎培養基，滅菌后取納豆菌0.3g接種于錐形瓶中，在40℃、150r/min的恒溫震蕩培養箱中培養18h后進行3次傳代培養；

3)納豆菌生長培養：將在基礎培養基中培養的納豆菌置于40℃、150r/min的恒溫震蕩培養箱中培養12～24h；

4)基礎培養基中碳源的優化：分別采用2％蔗糖、3％蔗糖、4％蔗糖、2％麥芽糖、3％麥芽糖、4％麥芽糖、2％乳糖、3％乳糖、4％乳糖、2％甘油、3％甘油、4％甘油替代上述基礎培養基中的葡萄糖，基礎培養基其余成分及含量不變，對納豆菌的生長進行培養并觀察記錄結果；

5)基礎培養基中氮源的優化：分別采用1％(NH₄)₂SO₄、2％(NH₄)₂SO₄、3％(NH₄)₂SO₄、1％酵母浸粉、2％酵母浸粉、3％酵母浸粉、1％酸水解酪蛋白、2％酸水解酪蛋白、3％酸水解酪蛋白、1％NH₄Cl、2％NH₄Cl、3％NH₄Cl替代上述基礎培養基中的蛋白胨，基礎培養基其余成分及含量不變，對納豆菌的生長進行培養并觀察記錄結果；

6)基礎培養基中生長因子的優化：將果蔬汁作為生長因子添加到基礎培養基中，分別添加10％胡蘿卜汁、10％西紅柿汁、10％菠蘿皮汁、5％胡蘿卜汁、5％西紅柿汁、5％菠蘿皮汁、15％胡蘿卜汁、15％西紅柿汁、15％菠蘿皮汁，基礎培養基其余成分及含量不變，對納豆菌的生長進行培養并觀察記錄結果；

7)分別將上述優化培養基測量培養基的OD600nm值，篩選出納豆菌增菌效果較好的三種碳源，通過對單因素試驗的結果進行分析并利用正交試驗進一步優化培養基配方；

8)將上述正交試驗做出的最優方案、理論上的最優方案及基礎培養基進行重新培養，測定它們的OD600nm值進行比較，并采用稀釋平板計數法在40℃下分別培養24h后進行計數，以最終的菌落數作為最主要的指標得到培養基的最佳配方；

所述步驟4)、5)、6)中的納豆菌的生長培養條件為：在無菌條件下將液體種子培養基接種到各個優化培養基中，調節pH值為7.2，分裝高壓滅菌，冷卻，在無菌操作臺中進行接種，接種量為5％，在40℃的恒溫振蕩培養箱中培養14h、17h、20h；

所述步驟8)中的重新培養條件為：分別在三種培養基中接種5％的納豆菌，在40℃的恒溫振蕩培養箱中培養17h。

3.根據權利要求2所述的納豆菌培養基的優化方法，其特征在于，所述步驟7)、8)中培養基的OD600nm值的測定方法為：培養完成后利用未接種的培養基作為空白樣，經紫外分光光度計測定并進行比較。