[發明專利]細胞工廠制備麻疹病毒原液及麻疹系列減毒活疫苗制劑

在審

• 申請號: 201710585496.7
• 申請日: 2017-07-18
• 公開（公告）號: CN107418936A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 付永其;宋艷梅;楊云凱;高靜;張穎欣;劉輝;孫雅;申亞楠;律苗
• 申請（專利權）人: 北京北生研生物制品有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02;A61K39/165;A61K39/20;A61K39/295;A61P31/14
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司11127
• 代理人: 韓蕾,姚亮

1.一種利用細胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其包括以下步驟：

選用SPF雞胚細胞，加入細胞培養液制備成細胞懸浮液，將細胞懸浮液加入到細胞工廠中；

將麻疹病毒的工作種子與細胞懸浮液按照(0.005-0.05)：1的比例接種于細胞工廠中，于33±1℃的溫度下靜置培養3-4天，傾去原細胞培養液，換以新鮮的細胞培養液繼續培養；

當細胞出現5％-10％的病變時，傾去細胞培養液，用不少于原細胞培養液量的洗液洗滌細胞表面，并換以病毒維持液繼續培養；

當細胞出現50％-75％的病變時，收獲單次麻疹病毒液。

2.根據權利要求1所述的利用細胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述細胞培養液為滅能小牛血清的0.2％乳蛋白的Earle’s液。

3.根據權利要求1或2所述的利用細胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述細胞懸浮液制備方法為：

選用9-11日齡來自SPF雞群的雞蛋，經消毒后取出雞胚，去除雞胚頭部及內臟，剪碎；用0.125％的胰蛋白酶于37±1℃溫度下對剪碎的雞胚水浴消化18-22min，然后加入0.2％的乳蛋白Earle’s液進行分散處理，最后加入含滅能小牛血清的0.2％的乳蛋白Earle’s液作為細胞培養液，得到細胞懸浮液。

4.根據權利要求1所述的利用細胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，當細胞出現50％-75％的病變時，收獲單次麻疹病毒液的具體操作為：

當細胞出現50％病變時，進行第一次收獲麻疹病毒液，收獲后再加入新鮮的病毒維持液繼續培養；

繼續培養12h后，進行第二次收獲麻疹病毒液，收獲后若細胞出現大量空洞或大面積拉網，則停止繼續培養；否則再加入新鮮的病毒維持液繼續培養；

當細胞出現75％病變時，進行第三次收獲麻疹病毒液。

5.根據權利要求1或4所述的利用細胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述洗液為Earle’s液；

優選地，所述病毒維持液為不含任何抗生素的M-199培養液。

6.根據權利要求1所述的利用細胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述麻疹病毒為麻疹病毒減毒株滬191。

7.根據權利要求1所述的利用細胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述細胞工廠為CF40。

8.一種麻疹減毒活疫苗制劑，其是按照包括以下步驟的方法制備得到的：

采用權利要求1-7任一項所述的方法制備的麻疹病毒原液，按照麻疹病毒滴度為5.1 1gCCID₅₀/mL的配制點，加入保護劑混合，配制得到麻疹減毒活疫苗制劑。

9.一種麻風聯合減毒活疫苗制劑，其是按照包括以下步驟的方法制備得到的：

采用權利要求1-7任一項所述的方法制備的麻疹病毒原液，與風疹病毒原液按照麻疹病毒和風疹病毒滴度均為5.1 1gCCID₅₀/mL的配制點等比例混合，加入保護劑混合，配制得到麻風聯合減毒活疫苗制劑。

10.一種麻腮風聯合減毒活疫苗制劑，其是按照包括以下步驟的方法制備得到的：

采用權利要求1-7任一項所述的方法制備的麻疹病毒原液，與風疹病毒原液和腮腺炎病毒原液，按照麻疹病毒和風疹病毒滴度均為4.5 1gCCID₅₀/mL的配制點、腮腺炎病毒滴度為6.1 1gCCID₅₀/mL的配制點進行稀配，并加入保護劑，混合后，配制得到麻腮風聯合減毒活疫苗制劑。