[發(fā)明專利]細(xì)胞工廠制備麻疹病毒原液及麻疹系列減毒活疫苗制劑

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710585496.7
• 申請(qǐng)日: 2017-07-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107418936A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 付永其;宋艷梅;楊云凱;高靜;張穎欣;劉輝;孫雅;申亞楠;律苗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京北生研生物制品有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/00
• 分類號(hào): C12N7/00;C12N7/02;A61K39/165;A61K39/20;A61K39/295;A61P31/14
• 代理公司: 北京三友知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11127
• 代理人: 韓蕾,姚亮

1.一種利用細(xì)胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其包括以下步驟：

選用SPF雞胚細(xì)胞，加入細(xì)胞培養(yǎng)液制備成細(xì)胞懸浮液，將細(xì)胞懸浮液加入到細(xì)胞工廠中；

將麻疹病毒的工作種子與細(xì)胞懸浮液按照(0.005-0.05)：1的比例接種于細(xì)胞工廠中，于33±1℃的溫度下靜置培養(yǎng)3-4天，傾去原細(xì)胞培養(yǎng)液，換以新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；

當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)5％-10％的病變時(shí)，傾去細(xì)胞培養(yǎng)液，用不少于原細(xì)胞培養(yǎng)液量的洗液洗滌細(xì)胞表面，并換以病毒維持液繼續(xù)培養(yǎng)；

當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)50％-75％的病變時(shí)，收獲單次麻疹病毒液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用細(xì)胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述細(xì)胞培養(yǎng)液為滅能小牛血清的0.2％乳蛋白的Earle’s液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用細(xì)胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述細(xì)胞懸浮液制備方法為：

選用9-11日齡來(lái)自SPF雞群的雞蛋，經(jīng)消毒后取出雞胚，去除雞胚頭部及內(nèi)臟，剪碎；用0.125％的胰蛋白酶于37±1℃溫度下對(duì)剪碎的雞胚水浴消化18-22min，然后加入0.2％的乳蛋白Earle’s液進(jìn)行分散處理，最后加入含滅能小牛血清的0.2％的乳蛋白Earle’s液作為細(xì)胞培養(yǎng)液，得到細(xì)胞懸浮液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用細(xì)胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)50％-75％的病變時(shí)，收獲單次麻疹病毒液的具體操作為：

當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)50％病變時(shí)，進(jìn)行第一次收獲麻疹病毒液，收獲后再加入新鮮的病毒維持液繼續(xù)培養(yǎng)；

繼續(xù)培養(yǎng)12h后，進(jìn)行第二次收獲麻疹病毒液，收獲后若細(xì)胞出現(xiàn)大量空洞或大面積拉網(wǎng)，則停止繼續(xù)培養(yǎng)；否則再加入新鮮的病毒維持液繼續(xù)培養(yǎng)；

當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)75％病變時(shí)，進(jìn)行第三次收獲麻疹病毒液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的利用細(xì)胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述洗液為Earle’s液；

優(yōu)選地，所述病毒維持液為不含任何抗生素的M-199培養(yǎng)液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用細(xì)胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述麻疹病毒為麻疹病毒減毒株滬191。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用細(xì)胞工廠制備麻疹病毒原液的方法，其中，所述細(xì)胞工廠為CF40。

8.一種麻疹減毒活疫苗制劑，其是按照包括以下步驟的方法制備得到的：

采用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的方法制備的麻疹病毒原液，按照麻疹病毒滴度為5.1 1gCCID₅₀/mL的配制點(diǎn)，加入保護(hù)劑混合，配制得到麻疹減毒活疫苗制劑。

9.一種麻風(fēng)聯(lián)合減毒活疫苗制劑，其是按照包括以下步驟的方法制備得到的：

采用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的方法制備的麻疹病毒原液，與風(fēng)疹病毒原液按照麻疹病毒和風(fēng)疹病毒滴度均為5.1 1gCCID₅₀/mL的配制點(diǎn)等比例混合，加入保護(hù)劑混合，配制得到麻風(fēng)聯(lián)合減毒活疫苗制劑。

10.一種麻腮風(fēng)聯(lián)合減毒活疫苗制劑，其是按照包括以下步驟的方法制備得到的：

采用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的方法制備的麻疹病毒原液，與風(fēng)疹病毒原液和腮腺炎病毒原液，按照麻疹病毒和風(fēng)疹病毒滴度均為4.5 1gCCID₅₀/mL的配制點(diǎn)、腮腺炎病毒滴度為6.1 1gCCID₅₀/mL的配制點(diǎn)進(jìn)行稀配，并加入保護(hù)劑，混合后，配制得到麻腮風(fēng)聯(lián)合減毒活疫苗制劑。