[發明專利]用于檢測孢子絲菌病的試劑盒

有效

• 申請號: 201710584439.7
• 申請日: 2017-07-18
• 公開（公告）號: CN107478821B
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發明（設計）人: 田晶晶;尹煥才
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/536
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本案涉及一種用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，包括有獨立分裝的預包被有標志抗原的反應板、酶標標志抗原、顯色液和終止液。本案通過對特異性抗原的設計，利用雙抗原夾心法Elisa實現血清樣本中抗體的檢測，有效克服了從菌株中直接提取標志抗原含量不足、純度不高等缺陷，進而解決了由其引起的檢測敏感性不足、耗時較長等問題；本試劑盒操作簡單，程序簡化，易于重復，易于自動化檢測。

技術領域

本發明屬于生物試劑盒領域，特別涉及一種用于檢測孢子絲菌病的試劑盒。

背景技術

孢子絲菌病是由孢子絲菌復合體中的一種真菌感染所致慢性化膿性肉芽腫性的疾病，可以引起皮膚、皮下組織及附近淋巴系統的亞急性或慢性感染,另外也可引起黏膜、骨骼甚或系統性病變。孢子絲菌復合體包括：申克氏孢子絲菌，白色孢子絲菌、巴西孢子絲菌、球形孢子絲菌、盧里孢子絲菌和墨西哥孢子絲菌。

當前該病的診斷方法主要為真菌培養和組織病理檢查，其中，真菌培養是孢子絲菌病診斷的金標準。但是這兩種方法存在耗時長、操作繁瑣、技術要求高等缺點，同時陽性率、特異性均較低。

發明內容

針對現有技術的不足之處，本發明的目的在于提供一種用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，本試劑盒基于孢子絲菌的六種亞種表面抗原的篩選分析，選擇了一種共同的標志性抗原，通過構建體外真核表達系統，實現特異性抗原的量產，并據此研發靈敏度高、穩定性好的孢子絲菌病酶聯免疫試劑盒，以期徹底解決傳統診斷技術中敏感性不足和耗時較長等問題。

為實現上述目的，本發明的技術方案概述如下：

一種用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其包括有獨立分裝的預包被有標志抗原的反應板、酶標標志抗原、顯色液和終止液；

其中，所述標志抗原的序列為：

MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAHPTSGHYYDDAESEACLNGKAVYVTSNTEHNSVVAIPIARNGSLLLNHATSTATGGRGGNGINPRGMPAGPDALFSQGSITSAGNYLFAVNAGSNTVTMLAIDEHDPTKVTVVGEPAELPGEFPTTVGASDKFNLVCVGLTGAKAGVSCASYSWYGLGPFDELRTFDLHQTTPPHGPTNTVSHVFFSGDQETVFTTVKGDPAVNNTGFLAAYPVEHIHSSCYAIPSVSHKGVISSPDGTAVLFGSTPIPDTTNLFVTDASFGAAILGIDDYEEASTLYKTVIPGQDATCWVAICPATHTAFVTDIRMNRLVEMSLVNAEIIGEPIDLTTFNTDPGLTEIRSGGSFVYALSPGNGTTEAWITVLNALTKKPVQHALLTPLGLDRNAMGMAILV。

優選的是，所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其中，所述酶標標志抗原通過將辣根過氧化物酶采用過碘酸鈉法偶聯于所述標志抗原上制得。

優選的是，所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其中，所述顯色液為TMB顯色液。

優選的是，所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其中，所述終止液為2mol/L的硫酸。

優選的是，所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其中，所述預包被有標志抗原的反應板通過以下步驟制得：

1)包被：選用透明96孔酶標板，以pH＝9.6的碳酸鹽溶液作為包被緩沖液，將5μg/mL的所述標志抗原加入96孔酶標板中包被，4℃過夜孵育；

2)洗滌：用PBST緩沖液洗滌，拍干后于4℃保存；

3)封閉：向96孔酶標板中加入蛋白保護劑，以塑料膜封口，于37℃水浴2h，隨后以PBST緩沖液洗滌，拍干，于4℃保存。