[發(fā)明專利]用于檢測孢子絲菌病的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710584439.7
• 申請日: 2017-07-18
• 公開（公告）號: CN107478821B
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田晶晶;尹煥才
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/536
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

1.一種用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其特征在于，包括有獨立分裝的預(yù)包被有標(biāo)志抗原的反應(yīng)板、酶標(biāo)標(biāo)志抗原、顯色液和終止液；

其中，所述標(biāo)志抗原的序列為：

MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYSDLEGDFDVAVLPFSNSTNNGLLFINTTIASIAAKEEGVSLEKREAEAHPTSGHYYDDAESEACLNGKAVYVTSNTEHNSVVAIPIARNGSLLLNHATSTATGGRGGNGINPRGMPAGPDALFSQGSITSAGNYLFAVNAGSNTVTMLAIDEHDPTKVTVVGEPAELPGEFPTTVGASDKFNLVCVGLTGAKAGVSCASYSWYGLGPFDELRTFDLHQTTPPHGPTNTVSHVFFSGDQETVFTTVKGDPAVNNTGFLAAYPVEHIHSSCYAIPSVSHKGVISSPDGTAVLFGSTPIPDTTNLFVTDASFGAAILGIDDYEEASTLYKTVIPGQDATCWVAICPATHTAFVTDIRMNRLVEMSLVNAEIIGEPIDLTTFNTDPGLTEIRSGGSFVYALSPGNGTTEAWITVLNALTKKPVQHALLTPLGLDRNAMGMAILV。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)標(biāo)志抗原通過將辣根過氧化物酶采用過碘酸鈉法偶聯(lián)于所述標(biāo)志抗原上制得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其特征在于，所述顯色液為TMB顯色液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其特征在于，所述終止液為2mol/L的硫酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其特征在于，所述預(yù)包被有標(biāo)志抗原的反應(yīng)板通過以下步驟制得：

1)包被：選用透明96孔酶標(biāo)板，以pH＝9.6的碳酸鹽溶液作為包被緩沖液，將5μg/mL的所述標(biāo)志抗原加入96孔酶標(biāo)板中包被，4℃過夜孵育；

2)洗滌：用PBST緩沖液洗滌，拍干后于4℃保存；

3)封閉：向96孔酶標(biāo)板中加入蛋白保護(hù)劑，以塑料膜封口，于37℃水浴2h，隨后以PBST緩沖液洗滌，拍干，于4℃保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其特征在于，所述蛋白保護(hù)劑包括有氯化鉀、甘油和PBST緩沖液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其特征在于，所述氯化鉀的比重為0.4-0.6％。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其特征在于，所述甘油的比重為3-4％。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測孢子絲菌病的試劑盒，其特征在于，所述標(biāo)志抗原通過以下方法制得：將基因序列克隆至酵母表達(dá)載體pPICZalpha B，隨后電轉(zhuǎn)至畢赤酵母X-33，利用畢赤酵母X-33持續(xù)表達(dá)標(biāo)志抗原。