[發明專利]一種利用生物分析儀檢測腸炎沙門氏菌的方法

在審

• 申請號: 201710584381.6
• 申請日: 2017-07-18
• 公開（公告）號: CN107190086A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 董秋月
• 申請（專利權）人: 杭州更藍生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10;C12R1/42
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及微生物檢測領域，具體涉及一種利用生物分析儀檢測腸炎沙門氏菌的方法。

背景技術

致病菌(Pathogenic bacteria)能引起疾病的微生物稱為病原微生物或致病菌。病原微生物包括細菌、病毒、螺旋體、立克次氏體、衣原體、支原體、真菌及放線菌等。一般所說的致病菌指的是病原微生物中的細菌。細菌的致病性與其毒力、侵入數量及侵入門戶有關。雖然絕大多數細菌是無害甚至有益的，但是相當大一部分可以致病。條件致病菌只在特定條件下致病，如有傷口可以允許細菌進入血液，或者免疫力降低時。例如，金黃色葡萄球菌和鏈球菌也是正常菌群，常可以存在于體表皮膚，鼻腔而不引起疾病，但可以潛在引起皮膚感染，如肺炎(pneumonia)、腦膜炎(meningitis)和敗血癥(sepsis)等。

沙門氏菌是一種革蘭氏陰性短桿菌，不形成芽胞，臨床上可表現為胃腸炎、腸熱病、菌血癥綜合征或局灶性疾病。受此菌威脅最大的是嬰幼兒、老人及免疫缺陷個體。據統計在世界各國的種類細菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。我國內陸地區也以沙門氏菌為首位。當前，各國政府和學術研究機構都在致力于食品安全問題的研究，食品安全問題受到了空前的關注。

生理生化法和血清學法是目前國內絕大多數檢測機構都在使用的檢測沙門氏菌的方法，由于其檢測周期長、程序復雜、所需試劑繁多等缺點已遠遠不能滿足現代檢測要求。因而，在臨床食物中毒時，找到一種快速、簡單、準確的檢測方法顯得非常重要。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種利用生物分析儀檢測腸炎沙門氏菌的方法，可對腸炎沙門氏菌進行快速檢測，操作簡單快捷，具有較高的靈敏度和準確度，適用性強，有利于大范圍的應用推廣，對食品安全監測監管具有重大意義。

為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

一種利用生物分析儀檢測腸炎沙門氏菌的方法，包括以下步驟：

(1)提取待測腸炎沙門氏菌菌株的DNA；

(2)以提取的腸炎沙門氏菌菌株的DNA作為模板進行PCR反應；

(3)將凝膠基質與染料混合物按照一定質量比混合均勻，過濾；

(4)將凝膠染料混合物注入分離芯片中，將marker加入樣品孔中；

(5)將步驟(2)中的PCR產物加入樣品孔中，將ladder加入指定的ladder孔中；

(6)將芯片渦旋混勻后放入生物分析儀中進行自動檢測分析。

優選的，步驟(2)中PCR反應所用的引物序列為：

Sal-3a：5’-TATCGCCACGTTCGGGCAA-3’；

Sal-4a：5’-TCGCACCGTCAAAGGAACC-3’。

優選的，步驟(2)中PCR反應條件為：首先，94℃變性3min，之后進行25～30個擴增循環，擴增循環程式設定為94℃變性30s、70℃退火30s、72℃延伸1min。

優選的，步驟(2)PCR擴增循環后72℃延伸5min，PCR產物于4℃保存。

優選的，步驟(3)中凝膠基質和染料混合物的混合質量比為15:1～20:1。

優選的，步驟(3)中凝膠基質與染料混合物混合均勻后，用離心過濾器過濾。

優選的，步驟(4)中加入的marker的質量為1-5μL。

優選的，步驟(5)中加入的PCR產物的質量與加入的ladder的質量相同。

優選的，步驟(6)中的生物分析儀為Agilent 2100生物分析儀。

本發明具有如下有益效果：

本發明利用生物分析儀對腸炎沙門氏菌進行快速檢測，操作簡單快捷，具有較高的靈敏度和準確度，適用性強，有利于大范圍的應用推廣，對食品安全監測監管具有重大意義。

本發明的其它特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其它附圖。