[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710584381.6
• 申請(qǐng)日: 2017-07-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107190086A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董秋月
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 杭州更藍(lán)生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/10;C12R1/42
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取待測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌菌株的DNA；

(2)以提取的腸炎沙門(mén)氏菌菌株的DNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)；

(3)將凝膠基質(zhì)與染料混合物按照一定質(zhì)量比混合均勻，過(guò)濾；

(4)將凝膠染料混合物注入分離芯片中，將marker加入樣品孔中；

(5)將步驟(2)中的PCR產(chǎn)物加入樣品孔中，將ladder加入指定的ladder孔中；

(6)將芯片渦旋混勻后放入生物分析儀中進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)分析。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法，其特征在于，步驟(2)中PCR反應(yīng)所用的引物序列為：

Sal-3a：5’-TATCGCCACGTTCGGGCAA-3’；

Sal-4a：5’-TCGCACCGTCAAAGGAACC-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法，其特征在于，步驟(2)中PCR反應(yīng)條件為：首先，94℃變性3min，之后進(jìn)行25～30個(gè)擴(kuò)增循環(huán)，擴(kuò)增循環(huán)程式設(shè)定為94℃變性30s、70℃退火30s、72℃延伸1min。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法，其特征在于，步驟(2)PCR擴(kuò)增循環(huán)后72℃延伸5min，PCR產(chǎn)物于4℃保存。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法，其特征在于，步驟(3)中凝膠基質(zhì)和染料混合物的混合質(zhì)量比為15:1～20:1。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法，其特征在于，步驟(3)中凝膠基質(zhì)與染料混合物混合均勻后，用離心過(guò)濾器過(guò)濾。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法，其特征在于，步驟(4)中加入的marker的質(zhì)量為1～5μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法，其特征在于，步驟(5)中加入的PCR產(chǎn)物的質(zhì)量與加入的ladder的質(zhì)量相同。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用生物分析儀檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的方法，其特征在于，步驟(6)中的生物分析儀為Agilent 2100生物分析儀。