[發明專利]一種凍干保護劑、用其制備普洱茶用直投式凍干菌劑的方法與應用

有效

• 申請號: 201710584190.X
• 申請日: 2017-07-18
• 公開（公告）號: CN109266561B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 賈鰻;唐蜀昆;謝吉林;盧開陽;高林瑞;職曉陽;丁章貴
• 申請（專利權）人: 勐海茶業有限責任公司;云南大益微生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N1/04;A23F3/10;A23F3/16;C12R1/645
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵;郭凡

1.一種凍干保護劑，其特征在于，在制備普洱茶發酵用直投式凍干菌劑中使用，包括質量百分含量為5-15wt％生茶湯、0.5-10wt％蔗糖和余量的水；

所述生茶湯的制作過程為：按重量份數，將10份曬青毛茶浸泡于100份水中，80-100℃下浸提30-60min；浸提后冷卻，取上清液滅菌，即得生茶湯；

所述直投式凍干菌劑含有的菌種為于2014年1月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為CGMCC?NO.8683的食腺嘌呤節孢酵母菌(Arxual?adeninivorans)。

2.根據權利要求1所述凍干保護劑，其特征在于，所述凍干保護劑包括質量百分含量為8％-12％生茶湯、4-8％蔗糖和余量的水。

3.根據權利要求2所述凍干保護劑，其特征在于，所述凍干保護劑包括質量百分含量為10wt％生茶湯、6wt％蔗糖和余量的水。

4.一種制備普洱茶發酵用直投式凍干菌劑的方法，包括菌種的活化、菌種的增殖培養、菌體收集、預凍、真空冷凍干燥，其特征在于，預凍時使用權利要求1-3任一所述凍干保護劑；其中所述直投式凍干菌劑含有的菌種為于2014年1月6日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏號為CGMCC?NO.8683的食腺嘌呤節孢酵母菌(Arxual?adeninivorans)；

所述菌種的增殖培養為：將活化的菌種接至1/2YPD液體培養基中25-45℃增殖培養12-22h，得到增殖的菌液。

5.根據權利要求4所述方法，其特征在于，所述預凍為：在由菌體組成的菌泥中按質量比1:1加入凍干保護劑，混合后在-40℃預凍至固態，得到預凍菌劑。

6.根據權利要求4所述方法，其特征在于，所述真空冷凍干燥為：將預凍得到的預凍菌劑在真空條件下繼續-40℃干燥18-48h至含水量5％以下,即得到所述直投式凍干菌劑。

7.根據權利要求4所述方法，其特征在于，所述1/2YPD液體培養基包括大豆蛋白胨1wt％，酵母粉0.5wt％，葡萄糖1wt％和余量的水，pH4-9。

8.根據權利要求4-7任一所述方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)、菌種的活化：將食腺嘌呤節孢酵母菌(Arxual?adeninivorans)接種至YPD固體平板中25-45℃活化培養36-60h，挑取單菌落活化培養至第三代，得到活化的菌種；

(2)、菌種的增殖培養：將步驟(1)活化的菌種接至1/2YPD液體培養基中,控制起始OD值為0.1-0.2OD之間，25-45℃增殖培養12-22h，得到增殖的菌液；

(3)、菌體收集：將步驟(2)得到的增殖的菌液在0-4℃、6000-8000rpm離心10-20min，棄去上清液，得到菌泥；

(4)、預凍：在步驟(3)的菌泥中加入凍干保護劑，混合后-40℃預凍至固體，得到預凍菌劑；凍干保護劑與菌泥的質量比為1：1；

(5)、真空冷凍干燥：將步驟(4)的預凍菌劑真空條件下繼續-40℃干燥18-48h至含水量5％以下，得到所述直投式凍干菌劑。

9.根據權利要求8所述方法，其特征在于，步驟(1)中所述YPD固體平板作為活化培養基，包括大豆蛋白胨2wt％，酵母粉1wt％，葡萄糖2wt％，瓊脂1.5wt％和余量的水，pH4-9。

10.根據權利要求9所述方法，其特征在于，所述YPD固體平板作為活化培養基，pH為5.5-8。

11.一種由權利要求4-10任一所述方法制備得到的直投式凍干菌劑。

12.由權利要求4-10任一所述方法制備得到的直投式凍干菌劑在人工可控發酵過程和普洱茶液態發酵過程中的應用，所述直投式凍干菌劑在發酵過程中直接對普洱生茶進行發酵，無需對菌種進行活化、擴培。