[發明專利]PDE?5抑制劑膠體金免疫層析試紙條及其制備和使用方法

在審

• 申請號: 201710579030.6
• 申請日: 2017-07-17
• 公開（公告）號: CN107300617A
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發明（設計）人: 馮銳;龍飛;羅莉妮;楊鵬博
• 申請（專利權）人: 廣東志道醫藥科技有限公司;廣州安諾食品科學技術有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條，該試紙條包括PVC底板、樣品墊、金標墊、檢測線、控制線、硝基纖維素膜、吸水墊，其特征在于：所述樣品墊、金標墊、檢測線、控制線、硝基纖維素膜、吸水墊均設置在PVC底板的上方，所述樣品墊設置在PVC底板的一端的邊緣，金標墊設置在樣品墊內側并與樣品墊部分重疊；金標墊上包被有膠體金標記的那非類通用抗體和拉非類通用抗體混合物；所述吸水墊設置在PVC底板的另一端，硝基纖維素膜設置在金標墊與吸水墊之間并分別與兩者部分重疊；所述檢測線設置在硝基纖維素膜上靠近金標墊的一端，所述控制線噴涂在靠近吸水墊的一端。

2.根據權利要求1所述的PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述樣品墊和金標墊為玻璃纖維膜。

3.根據權利要求1所述的PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述檢測線包被那非類通用半抗原與載體蛋白的偶聯物，以及拉非類通用半抗原與載體蛋白的偶聯物。

4.根據權利要求1所述的PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述控制線上包被兔抗鼠或羊抗鼠IgG抗體。

5.根據權利要求1所述的PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述那非類通用半抗原(NFA)如式Ⅰ所示，所述拉非類通用半抗原(LFA)如式Ⅱ所示：

6.如權利要求1-5任意一項所述的PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1).制備通用半抗原-載體蛋白偶聯物：將那非類通用半抗原(NFA)或拉非類通用半抗原與牛血清白蛋白或卵清白蛋白，通過碳二亞胺法、活化酯法、混合酸酐法、重氮化法或戊二醛法等方法進行偶聯，制備通用半抗原-BSA偶聯物與通用半抗原-OVA偶聯物；

(2).制備那非類通用抗體和拉非類通用抗體：將通用半抗原-BSA偶聯物多次免疫小鼠，取小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞在體外進行融合，制備雜交瘤細胞，將陽性雜交瘤細胞注入小鼠腹腔收集腹水，或以體外細胞培養的收集上清液的方式制備那非類通用抗體和拉非類通用抗體；

(3).制備膠體金：以檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液，膠體金溶液中膠體金顆粒直徑在20～40nm之間；

(4).膠體金標記抗體：在膠體金溶液中加入那非類通用抗體和拉非類通用抗體，加入上述兩種抗體的量為每毫升膠體金溶液中加入1μg～20μg，加入后混勻，通過離心純化、濃縮，制備成膠體金標記的那非類通用抗體和拉非類通用抗體混合物；

(5).將膠體金標記的那非類通用抗體和拉非類通用抗體混合物噴涂并固定在金標墊上，將NFA-OVA偶聯物和LFA-OVA偶聯物包被在檢測線上(稱作包被抗原)，將兔抗鼠或羊抗鼠IgG抗體包被在控制線上，并充分干燥；

(6).將硝基纖維素膜、金標墊、樣品墊、吸水墊依次粘合在PVC底板上，切成條狀，即制成檢測那非類和拉非類成分的膠體金免疫層析試紙條。

7.根據權利要求6所述的PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：步驟(4)中，那非類通用抗體與拉非類通用抗體的比例為1:1。

8.如權利要求1-5任意一項所述的PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條的使用方法，其特征在于：取少量樣品用提取溶劑提取，得到樣品溶液，將適量樣品溶液滴加到樣品墊上，樣品溶液將會向吸水墊端移動；待過5-15分鐘后，根據檢測線和控制線的顯色情況，判斷樣品中是否含有那非類或拉非類成分，判斷方法如下：

1)檢測線顯紅色，控制線顯紅色——陰性結果，樣品中不含那非類和拉非類成分；

2)檢測線不顯紅色，控制線顯紅色——陽性結果，樣品中含有那非類或拉非類成分；

3)無論檢測線顯不顯紅色，控制線不顯紅色——試紙條失效。

9.根據權利要求8所述的PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條的使用方法，其特征在于：所述提取溶劑為乙醇水溶液或磷酸鹽緩沖液中的一種或兩者的混合物。

10.根據權利要求9所述的PDE-5抑制劑膠體金免疫層析試紙條的使用方法，其特征在于：所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.001-0.1mol/L，乙醇濃度為0.5％-20％。