[發(fā)明專利]與吊白塊特異結(jié)合的核酸適配體Sf-B09及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710578798.1
• 申請日: 2017-07-17
• 公開（公告）號: CN107505463B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓芹芹;李潔;夏雪山;宋玉竹;張金陽;陳強;王炳輝
• 申請（專利權(quán)）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種與吊白塊特異性結(jié)合的核酸適配體Sf-B09，其特征在于：核酸適配體Sf-B09的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的與吊白塊特異性結(jié)合的核酸適配體Sf-B09，其特征在于：二級結(jié)構(gòu)均具有突出的環(huán)和莖，且存在G-四鏈體結(jié)構(gòu)，吉布斯自由能分別為DG=-11.42。

3.權(quán)利要求1所述的與吊白塊特異性結(jié)合的核酸適配體Sf-B09在制備識別吊白塊的試劑或在制備檢測吊白塊的試劑盒中的應用，其特征在于：其與核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的核酸適配體Sf-A09或與核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的核酸適配體Sf-E07搭配使用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應用，所述試劑盒為基于核酸適配體的層析法檢測試劑盒，其包括檢測試紙，所述檢測試紙包括底板（1），粘在底板（1）上且依次搭接的樣品墊（2）、結(jié)合墊（3）、硝酸纖維素膜（4）、吸水墊（7）；所述硝酸纖維素膜（4）上靠近結(jié)合墊（3）的一側(cè)設(shè)有檢測線（5），硝酸纖維素膜（4）上靠近吸水墊（7）的一側(cè)設(shè)有質(zhì)控線（6）；其特征在于：結(jié)合墊（3）上涂有膠體金標記的核酸適配體SF-B09；檢測線（5）上涂有核酸適配體A與鏈霉親和素的復合物；質(zhì)控線（6）上涂有鏈霉親和素溶液，其中核酸適配體A為核酸適配體Sf-A09或核酸適配體Sf-E07。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于：核酸適配體SF-B09的核苷酸序列5’端被生物素標記，3’端被巰基標記；核酸適配體A的核苷酸序列5’端被生物素標記。

6.制備權(quán)利要求4或5中所述試劑盒的方法，包括如下步驟：

（1）用膠體金標記核酸適配體SF-B09；

（2）將樣品墊放入含有3%牛血清蛋白、0.05%吐溫-20的0.01M pH 7.4磷酸緩沖液溶液中浸泡1 小時以上，37℃烘干備用；

（3）將結(jié)合墊放入含有5%牛血清蛋白、1%聚乙二醇-20000、0.05%吐溫-20、5%蔗糖的0.01M pH 7.4磷酸緩沖液溶液中浸泡1 小時以上，37℃烘干備用；

（4）將步驟（1）被膠體金標記的核酸適配體SF-B09懸浮于含有5%牛血清蛋白、1%聚乙二醇-20000、0.05%吐溫-20、5%蔗糖的0.01M pH 7.4磷酸緩沖液溶液中，并噴于步驟（3）活化過的結(jié)合墊上，37℃烘干備用；

（5）在硝酸纖維素膜上檢測線位置以0.5-1.5μL/cm的流量噴點核酸適配體A與鏈霉親和素的復合物，在質(zhì)控線位置以0.5-1.5μL/cm的流量噴點鏈霉親和素溶液，烘干備用；

（6）將樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次搭接并粘合于底板上，切成檢測試紙條，組裝于硬質(zhì)塑料卡包裝。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于：步驟（1）是用直徑20-40nm的膠體金標記核酸適配體Sf-B09；步驟（5）中噴點于檢測線位置的核酸適配體A與鏈霉親和素的復合物是將濃度為25-35μM的核酸適配體B溶液與濃度為0.5-1.5mg/mL的鏈霉親和素溶液按體積比5-3:1混合制備而成；噴點于質(zhì)控線位置的鏈霉親和素溶液是將鏈霉親和素溶于0.01MpH7.4磷酸緩沖液溶液中制得，濃度為0.5-1.5mg/mL。