[發(fā)明專利]一種鑒別黃姑魚遺傳性別的分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710576187.3
• 申請(qǐng)日: 2017-07-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107326077B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王志勇;李完波;孫莎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6879
• 分類號(hào): C12Q1/6879;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市精誠(chéng)新創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218
• 代理人: 方惠春

1.一種黃姑魚遺傳性別相關(guān)的分子標(biāo)記，其特征在于，所述分子標(biāo)記表現(xiàn)為SEQ IDNO:1所示核苷酸序列的插入/缺失長(zhǎng)度多態(tài)性。

2.權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記，其特征在于，具有SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的個(gè)體，為遺傳性別是雌性的黃姑魚；缺失SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的個(gè)體，為遺傳性別是雄性的黃姑魚。

3.一種用于檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述分子標(biāo)記的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)為SEQID NO:2-3或SEQ ID NO:4-5所示的核苷酸序列。

4.權(quán)利要求3所述引物對(duì)，其特征在于，利用所述引物對(duì)SEQ ID NO:2-3對(duì)待檢測(cè)黃姑魚基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，當(dāng)所述擴(kuò)增片段存在且大小為258bp時(shí)，所述待測(cè)黃姑魚具有SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的缺失，為遺傳性別是雄性的黃姑魚；當(dāng)沒(méi)有出現(xiàn)所述擴(kuò)增片段時(shí)，所述待測(cè)個(gè)體具有SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的插入，為遺傳性別是雌性的黃姑魚；或

利用所述引物對(duì)SEQ ID NO:4-5對(duì)待檢測(cè)黃姑魚基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并檢測(cè)擴(kuò)增片段的數(shù)量和長(zhǎng)度，當(dāng)所述擴(kuò)增片段有兩條，長(zhǎng)度分別為385bp和340bp，則所述待測(cè)個(gè)體黃姑魚同時(shí)具有SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的缺失與插入，為遺傳性別是雄性的黃姑魚；當(dāng)所述擴(kuò)增片段只有一條385bp帶時(shí)，所述待測(cè)個(gè)體具有SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的插入，為遺傳性別是雌性的黃姑魚。

5.一種用于檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述分子標(biāo)記的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求3或4的引物對(duì)。

6.權(quán)利要求1或2所述分子標(biāo)記或權(quán)利要求3或4的引物對(duì)或權(quán)利要求5所述試劑盒在黃姑魚育種中的用途。

7.一種鑒別黃姑魚性別的方法，其特征在于，對(duì)待測(cè)黃姑魚進(jìn)行權(quán)利要求1或2所述分子標(biāo)記的檢測(cè)，以便確定所述待測(cè)黃姑魚的遺傳性別。

8.權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

利用權(quán)利要求3或4的引物對(duì)或權(quán)利要求5所述試劑盒對(duì)待測(cè)黃姑魚基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

檢測(cè)擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度與數(shù)量，以及

基于所述擴(kuò)增片段的數(shù)量與長(zhǎng)度，確定所述待測(cè)黃姑魚的性別，

其中，當(dāng)利用權(quán)利要求3的引物對(duì)擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增結(jié)果為一條258bp的條帶時(shí)，所述待測(cè)個(gè)體為遺傳性別是雄性的黃姑魚；而沒(méi)有擴(kuò)增條帶時(shí)，所述待測(cè)個(gè)體為遺傳性別是雌性的黃姑魚；當(dāng)利用權(quán)利要求4的引物對(duì)擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增結(jié)果為385bp和340bp兩條帶時(shí)，所述待測(cè)個(gè)體為遺傳性別是雄性的黃姑魚；而擴(kuò)增結(jié)果為385bp一條帶時(shí)，所述待測(cè)個(gè)體為遺傳性別是雌性的黃姑魚。

9.權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述檢測(cè)擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度為利用凝膠電泳，檢測(cè)所述擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度。

10.權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述凝膠電泳為瓊脂糖凝膠電泳。

11.一種黃姑魚輔助育種方法，其特征在于，所述方法包括：

通過(guò)權(quán)利要求7-10任一項(xiàng)所述方法，檢測(cè)權(quán)利要求1或2所述分子標(biāo)記，以便確定待測(cè)黃姑魚的性別。