[發明專利]一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法

在審

• 申請號: 201710575840.4
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN107271620A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 李成忠;孫燕;周霞;左偉勇;張衡峰;徐朋朋;張建
• 申請（專利權）人: 江蘇農牧科技職業學院
• 主分類號: G01N33/03
• 分類號: G01N33/03
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所32237
• 代理人: 龔擁軍

技術領域

本發明涉及牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗技術領域，具體為一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法。

背景技術

牡丹籽油，又稱牡丹油，是由牡丹籽提取的木本堅果植物油，是中國特有的，因其營養豐富而獨特，又有醫療保健作用，被有關專家稱為“世界上最好的油，”是植物油中的珍品，也是中國獨有的健康保健食用油脂。

牡丹籽是牡丹植株的精華結晶，傳承了牡丹本身具有的一切特性外，它更有自己獨特的醫藥和營養成分，牡丹種子是受果殼和種殼雙層保護的堅果，具有天然的“長壽”基因。牡丹籽油是迄今為止所發現的油脂中最適合人體營養的油脂，是所有食用油總營養價值最高，成份結構最合理的。含有豐富的多不飽和脂肪酸，其營養價值遠遠超過被稱為“人類健康之油”橄欖油，亞麻酸含量是橄欖油的二百多倍。多項指標也都高于其他油種。又不易氧化沉積在人體血管壁、心臟冠狀動脈等部位。正是這些成分使其在醫學和營養上發揮了重要作用而成為理想的食用油。不夸張地說，牡丹籽油的營養和保健作用是其它食用油無法比擬的。

目前，有關牡丹籽油的研究多集中在提取工藝、成分分析以及抗氧化活性研究等方面，有關牡丹籽油對免疫功能調節作用的深入研究較少。本發明從小鼠血清一氧化氮及一氧化氮合成酶水平、細胞因子水平、腸道sIgA含量的變化的角度，研究牡丹油對小鼠免疫功能的調節作用與作用途徑，闡明應用牡丹油對改善小鼠健康水平的作用。

發明內容

（一）解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，解決了有關牡丹籽油的研究多集中在提取工藝、成分分析以及抗氧化活性研究等方面，有關牡丹籽油對免疫功能調節作用的深入研究較少的問題。

（二）技術方案

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，包括以下步驟：

S1、選擇試驗小鼠：小鼠選擇二十一日齡ICR清潔級雄性小鼠，體重約

十三克，試驗鼠用顆粒飼料；

S2、準備試驗材料：準備試驗所需要的牡丹籽油、牡丹籽油陽性制品、白介素－6（IL-6）、白介素-2（IL-2）腫瘤壞死因子－α（TNF-α）放射免疫試劑盒、分泌型免疫球蛋白（sIgA）放射免疫試劑盒和一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）測定試劑盒；

S3、動物實驗及樣品制備：小鼠50只，隨機分為5個處理組，即對照組（I組）、低劑量組（II組）、中劑量組（III組）、高劑量組（IV組）和陽性對照組（V組），每組10只，基礎日糧預飼3天后進行試驗，對照組每天灌胃生理鹽水，II組、III組、IV組分別每天灌胃牡丹籽油0.25mL、0.5mL、1mL，V組每天灌胃牡丹籽油復合物0.5mL，連續灌胃20天，于第21天，用摘除眼球取血法取血，3000rpm離心15min，取血清，-20℃保存備用；處死各組小鼠，取脾臟并稱重，然后用生理鹽水1:10稀釋并勻漿，5000rpm離心15min后取上清液，-20℃保存備用；取整段小腸，清洗腸內容物后，刮取腸黏膜，用生理鹽水1:10稀釋后勻漿，6000rpm離心30min后取上清液，-20℃保存備用；

S4、數據測定：分別對小腸黏膜sIgA水平、脾臟中IL-2，IL-6、TNF-α水平、血清中NO含量和血清中一氧化氮合成酶（NOS）活性進行測定；

S5、數據處理：對完成數據測定的數據均采用統計學進行處理；

S6、結果分析：對小鼠的脾臟重與相對脾重比較、小鼠血清NO、一氧化氮合成酶水平、小鼠脾臟IL-2、IL-6、TNF-α水平和小鼠腸黏膜中sIgA的含量進行數據分析。

優選的，在S2中，牡丹籽油、牡丹籽油陽性制品均由江蘇農牧科技職業學院園林科技系制備；白介素－6（IL-6）、白介素-2（IL-2）腫瘤壞死因子－α（TNF-α）放射免疫試劑盒，購于北京北方生物技術研究所；分泌型免疫球蛋白（sIgA）放射免疫試劑盒，購于中國原子能科學研究所。一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）測定試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

優選的，在S4中，用RIA法測定小腸黏膜sIgA水平，脾臟中IL-2，IL-6、TNF-α水平，血清中NO含量采用硝酸還原酶法測定，血清中一氧化氮合成酶（NOS）活性采用比色法測定。

優選的，在S5中，數據均以平均數±標準差（Mean±SD）表示，統計學處理用SPSS16.0進行One-WayANOVA檢驗，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。