[發明專利]一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法

在審

• 申請號: 201710575840.4
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN107271620A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 李成忠;孫燕;周霞;左偉勇;張衡峰;徐朋朋;張建
• 申請（專利權）人: 江蘇農牧科技職業學院
• 主分類號: G01N33/03
• 分類號: G01N33/03
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所32237
• 代理人: 龔擁軍

1.一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1、選擇試驗小鼠：小鼠選擇二十一日齡ICR清潔級雄性小鼠，體重約

十三克，試驗鼠用顆粒飼料；

S2、準備試驗材料：準備試驗所需要的牡丹籽油、牡丹籽油陽性制品、白介素－6（IL-6）、白介素-2（IL-2）腫瘤壞死因子－α（TNF-α）放射免疫試劑盒、分泌型免疫球蛋白（sIgA）放射免疫試劑盒和一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）測定試劑盒；

S3、動物實驗及樣品制備：小鼠50只，隨機分為5個處理組，即對照組（I組）、低劑量組（II組）、中劑量組（III組）、高劑量組（IV組）和陽性對照組（V組），每組10只，基礎日糧預飼3天后進行試驗，對照組每天灌胃生理鹽水，II組、III組、IV組分別每天灌胃牡丹籽油0.25mL、0.5mL、1mL，V組每天灌胃牡丹籽油復合物0.5mL，連續灌胃20天，于第21天，用摘除眼球取血法取血，3000rpm離心15min，取血清，-20℃保存備用；處死各組小鼠，取脾臟并稱重，然后用生理鹽水1:10稀釋并勻漿，5000rpm離心15min后取上清液，-20℃保存備用；取整段小腸，清洗腸內容物后，刮取腸黏膜，用生理鹽水1:10稀釋后勻漿，6000rpm離心30min后取上清液，-20℃保存備用；

S4、數據測定：分別對小腸黏膜sIgA水平、脾臟中IL-2，IL-6、TNF-α水平、血清中NO含量和血清中一氧化氮合成酶（NOS）活性進行測定；

S5、數據處理：對完成數據測定的數據均采用統計學進行處理；

S6、結果分析：對小鼠的脾臟重與相對脾重比較、小鼠血清NO、一氧化氮合成酶水平、小鼠脾臟IL-2、IL-6、TNF-α水平和小鼠腸黏膜中sIgA的含量進行數據分析。

2.根據權利要求1所述的一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，其特征在于：在S2中，牡丹籽油、牡丹籽油陽性制品均由江蘇農牧科技職業學院園林科技系制備；白介素－6（IL-6）、白介素-2（IL-2）腫瘤壞死因子－α（TNF-α）放射免疫試劑盒，購于北京北方生物技術研究所；分泌型免疫球蛋白（sIgA）放射免疫試劑盒，購于中國原子能科學研究所；一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（NOS）測定試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

3.根據權利要求1所述的一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，其特征在于：在S4中，用RIA法測定小腸黏膜sIgA水平，脾臟中IL-2，IL-6、TNF-α水平，血清中NO含量采用硝酸還原酶法測定，血清中一氧化氮合成酶（NOS）活性采用比色法測定。

4.根據權利要求1所述的一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，其特征在于：在S5中，數據均以平均數±標準差（Mean±SD）表示，統計學處理用SPSS16.0進行One-WayANOVA檢驗，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

5.根據權利要求1所述的一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，其特征在于：在S6中，相對脾重的計算公式為：脾重/體重×100%，試驗結果表明，如圖1所示，與I組相比較，II、III、IV和V組均提高了小鼠的脾臟重量和相對脾臟重量，其中IV差異顯著（P<0.05）。

6.根據權利要求1所述的一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，其特征在于：在S6中，如圖2所示，與I組相比，各組血清NO及NOS水平均有所升高，其中III組血清NO水平顯著提高（P<0.05）。

7.根據權利要求1所述的一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，其特征在于：在S6中，如圖3所示，與I組相比，III組脾臟IL-2顯著升高（P<0.05），II組脾臟TNF-α顯著降低（P<0.05）；各組脾臟中IL-6水平均較I組升高，但統計結果差異也不顯著（P>0.05）。

8.根據權利要求1所述的一種牡丹籽油對小鼠免疫功能影響的實驗方法，其特征在于：在S6中，從圖4可以看出，與I組相比較，各組腸道黏膜sIgA水平均提高，其中III組統計分析差異顯著（P<0.05），試驗結果表明：牡丹籽油能提高小鼠腸黏膜sIgA水平，能夠影響小鼠腸道免疫功能。