[發(fā)明專(zhuān)利]一種ST37型艱難梭菌及其單位點(diǎn)變異型ST81的鑒定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710575184.8
• 申請(qǐng)日: 2017-07-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107202834A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙建宏;李茹鑫;楊靖;孫素菊;李志榮;強(qiáng)翠欣;魏宏蓮;時(shí)東彥;翟宇;王曉明;趙杏珍;趙寶鑫;趙峰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/62
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/62
• 代理公司: 石家莊國(guó)域?qū)＠虡?biāo)事務(wù)所有限公司13112
• 代理人: 劉曉敏,蘇艷肅

1.一種ST37型艱難梭菌及其單位點(diǎn)變異型ST81的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：提取待鑒定艱難梭菌菌株中的蛋白質(zhì)，得到質(zhì)譜測(cè)試樣品；利用質(zhì)譜檢測(cè)設(shè)備對(duì)上述樣品進(jìn)行檢測(cè)，所得質(zhì)譜圖中在m/z3235~3245和m/z3280~3290處同時(shí)存在特異性的蛋白峰的菌株為ST37型艱難梭菌或其單位點(diǎn)變異型ST81。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ST37型艱難梭菌及其單位點(diǎn)變異型ST81的鑒定方法，其特征在于，采用乙醇/甲酸法提取待鑒定艱難梭菌菌株中的蛋白質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的ST37型艱難梭菌及其單位點(diǎn)變異型ST81的鑒定方法，其特征在于，所述質(zhì)譜測(cè)試樣品按照以下步驟制備：取5~10mg新鮮培養(yǎng)的艱難梭菌菌株充分懸浮于300μL超純水中，再加入900μL無(wú)水乙醇，充分混勻后，12000×g離心2min，棄去上清液，向沉淀中加入20μL70%甲酸水溶液并混勻，再加入20μL乙腈，充分振蕩混勻，12000×g離心2min，將1μL含有蛋白提取物的上清液轉(zhuǎn)移到樣品靶板上，室溫下干燥，之后，將1μL CHCA基質(zhì)覆蓋在樣品靶板上，避風(fēng)干燥，即得到質(zhì)譜測(cè)試樣品。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ST37型艱難梭菌及其單位點(diǎn)變異型ST81的鑒定方法，其特征在于，所用的質(zhì)譜檢測(cè)設(shè)備為Microflex LT基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀或VITEK MS全自動(dòng)快速微生物質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)。