[發(fā)明專利]新品種半滑舌鰨的分子選育方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710574005.9
• 申請(qǐng)日: 2017-07-14
• 公開（公告）號(hào): CN107287323B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛致勇;李超;魯翠云;孫效文;鄭先虎;程磊;毛成全
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海陽(yáng)市黃海水產(chǎn)有限公司;中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;G16B5/00;G16B40/10
• 代理公司: 煙臺(tái)雙聯(lián)專利事務(wù)所(普通合伙) 37225
• 代理人: 梁翠榮

1.新品種半滑舌鰨的分子選育方法，其特征在于新品種半滑舌鰨按以下步驟選育：

一、根據(jù)新品種的設(shè)計(jì)需求，挑選表型性狀符合要求的半滑舌鰨作為親本，表型性狀挑選公式為，公式中Xn為親本的表型性狀測(cè)定值，為半滑舌鰨群體表型性狀的平均值，S為半滑舌鰨群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差；

二、檢測(cè)分析親本間的遺傳組成，a.提取親本基因組DNA，采用常規(guī)酚-氯仿抽提的方法或者使用基因組DNA純化試劑盒；b.用20對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物對(duì)親本基因組DNA分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，每對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物的PCR擴(kuò)增反應(yīng)總體積為15L，包括10.8L反應(yīng)緩沖液、100ng親本個(gè)體基因組DNA、0.6μL微衛(wèi)星標(biāo)記上下游引物、0.5U TaqDNA聚合酶和余量的滅菌超純水；其中反應(yīng)緩沖液含有終濃度10 mmol/L Tris-Cl、50 mmol/L KCl、1.5 mmol/L MgCl₂、200μmol/L dNTP和余量的超純水；c.將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)，獲得產(chǎn)物條帶圖片，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳檢測(cè)過(guò)程為：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物先使用8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳2-3小時(shí)，之后將凝膠染色10分鐘，然后顯色5-10分鐘，將凝膠掃描或照相獲得產(chǎn)物條帶圖片；所述的染色用染色液為0.1%硝酸銀溶液，所述的顯色用顯色液每升含有20g的NaOH、0.4g的Na₂CO₃和4mL的甲醛溶液；d.利用凝膠圖像分析軟件，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳條帶圖片轉(zhuǎn)化成數(shù)字信息數(shù)據(jù)；e.將數(shù)字信息數(shù)據(jù)導(dǎo)入遺傳分析軟件，計(jì)算獲得親本間的遺傳組成；

步驟b中選用的20對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物的序列為：

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（1） 上游引物：gggagtcaacaaccaaacca

下游引物：cactcgcaaagactgaggtg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（2） 上游引物：actgcgtccaaactgaggag

下游引物：cattccccactcactgtcct

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（3） 上游引物：tcctgtgggaggagaggaga

下游引物：acacacctgcacacaccagt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（4） 上游引物：ccatccgagaccttcagtgt

下游引物：acctgctcctcctctgtgag

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（5） 上游引物：acaaagctgcgttcctatcg

下游引物：ggatcctgcctttggtttct

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（6） 上游引物：atcgaggaggatctgtgtgg

下游引物：gcgtgagatgcaagaaaaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（7） 上游引物：tgcagcgcacattacctaac

下游引物：ggcacgctgaagctttaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（8） 上游引物：cgttgccatcacacaatttc

下游引物：caacgtgcatcgtgtctctt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（9） 上游引物：tgtgaagtcatgtggttctg

下游引物：tgagttggttgtatgtcctg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（10）上游引物：ggctgcctacaaacctcaac

下游引物：gaggactcagatgcacacga

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（11）上游引物：gtttccttcctttcattcct

下游引物：gaaatggacgtctgtgattt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（12）上游引物：cacaaaattgctgcttgcat

下游引物：aacactccaaccccaggtaa

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（13）上游引物：ctgccgtgatcttcacaaaa

下游引物：tccactgggacaagaaaaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（14）上游引物：ctgtgaccctcctcctgct

下游引物：ctccatgctgccagtgttt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（15）上游引物：aaagaggcgtgtcatcggtt

下游引物：cccaatcgctcaagaaatcc

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（16）上游引物：taccacgctgccttcaaatg

下游引物：ttcaccactgttctgctccac

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（17）上游引物：gacgaaggtttttgaatggtta

下游引物：gtgaggcacaggcttttgga

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（18）上游引物：tccgacccacagttgtatca

下游引物：taaacagatctgctgcagtgagt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（19）上游引物：tcatcagcccagttcaaagt

下游引物：ctacctctgcttcagctgtg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（20）上游引物：tctttaccgagaatctccctcc

下游引物：aaagggcctaccgaaagaat

三、根據(jù)遺傳組成，選擇親本間的遺傳距離0.7～1.0作為“閾值”范圍進(jìn)行配組，親本分成2個(gè)或2個(gè)以上繁殖群體；

四、繁殖群體內(nèi)親本自由組合交配，生產(chǎn)、培育子代半滑舌鰨至性成熟；

五、以子代半滑舌鰨為新一代親本，重復(fù)操作步驟一至四，直到達(dá)到新品種半滑舌鰨性狀的設(shè)計(jì)要求，即得到新品種半滑舌鰨。