[發明專利]運用內源熒光光譜技術檢測區分還原乳和生鮮乳的方法

在審

• 申請號: 201710571781.3
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107367494A
• 公開（公告）日: 2017-11-21
• 發明（設計）人: 陸維盈;杜麗娟;張亞瓊;牛宇戈
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 上海恒慧知識產權代理事務所(特殊普通合伙)31317
• 代理人: 張寧展

技術領域

本發明屬于食品安全檢測技術領域，具體的說，涉及一種運用內源熒光光譜技術檢測區分還原乳和生鮮乳的方法。

背景技術

還原乳又稱“還原奶”或者“復原乳”,是將生鮮乳經濃縮和干燥等過程將其變成濃縮粉或者干燥乳粉，再按照生鮮乳的標準，向其中添加適當比例的水等勾兌成為新鮮牛乳。因還原乳經兩次高溫殺菌，經二次加工的還原乳由于受加工過程中高溫的影響，其牛乳的賴氨酸與碳水化合物會發生美拉德反應，營養成分流失，使其營養價值變低，此外，牛乳的風味也會發生改變。由于其檢測技術的相對缺失，此種摻假行為不僅損害了消費者的消費權和知情權，而且對整個乳品行業產生不良的影響。

熒光圖譜技術是一種靈敏度非常高的檢測方法。由于牛乳中存在獨特發色團的氨基酸如酪氨酸，色氨酸及苯丙氨酸等具有獨特的共軛雙鍵結構，因此具有較強的熒光屬性。并且，它們的熒光激發波長因其分子結構的不同而不同。例如，酪氨酸，色氨酸及苯丙氨酸相應的激發波長分別為217nm，232nm及280nm。因此，若采用某一激發波長，則無法涵蓋樣品的整體熒光信息，得到較少的熒光信息，從而無法達到區分還原乳和生鮮乳的目的。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種運用內源熒光光譜技術檢測區分還原乳和生鮮乳的方法；其基于三維激發發射光譜(excitation-emission matrix spectroscopy,EEM spectroscopy)的三維網格圖譜的內源性熒光無損檢測技術，涵蓋樣品的整體熒光信息，從而達到區分還原乳和生鮮乳的目的。

本發明利用牛乳自身成分的熒光性質，使用酶標儀建立了內源熒光檢測技術，并在前期對樣品激發波長和釋放波長的篩選，最終使用全波長熒光掃描，測定生鮮乳和不同摻假比例的還原乳，建立無損快速檢測還原乳的技術。本發明的技術方案具體介紹如下。

本發明提供一種運用內源熒光光譜技術檢測區分還原乳和生鮮乳的方法，首先分別以生鮮乳和摻雜還原乳的樣品為對象，將所有測定的樣品凍干；凍干后的樣品充分研磨；隨后，通過三維激發發射光譜技術，用酶標儀采集得到三維熒光圖譜，將用酶標儀采集到的原始數據轉化為生鮮乳和摻雜還原乳的樣品的熒光三維圖和等高線圖，實現可視化區分，進而區分樣品中的生鮮乳中是否摻雜還原乳。

本發明中，采用酶標儀，設置激發波長為230～390nm，釋放波長為400～600nm，步長設置為2nm，激發和釋放的帶寬設置為5nm，gain設置為50，進行全波長熒光掃描采集數據，得到三維熒光圖譜。

本發明中，將用酶標儀采集到的原始數據從Excel導入到MATLAB R2013a軟件分析，作圖得到生鮮乳和摻雜還原乳的樣品的熒光三維圖和等高線圖。

本發明中，實現可視化區分時，參考的圖譜特征為：生鮮乳或者摻入質量體積比為0.5％還原乳的生鮮乳樣品，在激發波長340～360nm，釋放波長在400～420nm時，其熒光三維圖和等高線圖出現峰值；摻入質量體積比為10％還原乳的生鮮乳樣品，最強的熒光峰落在激發波長360～370nm和釋放波長440～480nm范圍之間。

和現有技術相比，本發明的有益效果在于：

本發明方法無需前處理，可直接用于檢測，其中并未引入任何化學試劑，是一種環境友好的檢測技術，而且其成本低廉，可包含樣品的大量熒光信息，能夠反應真實牛乳自身的信息，圖譜穩定可靠，得到的結果穩定性好及準確度高，具有潛在的應用推廣價值。

附圖說明

圖1為生鮮乳的三維熒光圖譜。

圖2為生鮮乳的等高線圖。

圖3為摻假0.5％(w/v))奶粉還原乳的三維熒光圖譜。

圖4為摻假0.5％(w/v)奶粉還原乳的等高線圖譜。

圖5為摻假10％(w/v)奶粉還原乳的三維熒光圖譜。

圖6為摻假10％(w/v)奶粉還原乳的等高線圖譜。

圖7為重復測定摻假10％(w/v)奶粉還原乳的三維熒光圖譜。

圖8為重復測定摻假10％(w/v)奶粉還原乳的等高線圖譜。

具體實施方式

下面結合附圖和實例對本發明進一步闡述。

實施例1

1.樣品制備：將儲存于-25℃生鮮乳，在常溫放置，待解凍后作為牛乳摻假底物。將N品牌的奶粉按照0.5％和10％(w/v)的比例添加到已解凍的生鮮乳中，渦旋1min，超聲20min至充分溶解。將所有測定的樣品凍干。凍干后的樣品充分研磨。稱取10mg的凍干粉，小心轉移到96孔板中，待測。