[發明專利]一種污泥處理復合微生物菌劑的制備方法

在審

• 申請號: 201710570326.1
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107245464A
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發明（設計）人: 張飛;周東
• 申請（專利權）人: 普利資環境科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F11/02;C02F11/14;C12R1/19;C12R1/07;C12R1/01
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司11246
• 代理人: 連平

1.一種污泥處理復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：將大腸桿菌、芽孢桿菌、硫氧化菌、放線菌、硝化細菌及乳酸菌混合制成復合微生物菌劑；具體包括以下制備步驟：

第一步：大腸桿菌與放線菌的培養：

稱取15g營養肉湯培養基于500ml蒸餾水中，添加0.1-1g三環癸胺固體，經振蕩攪拌后放入立式壓力蒸汽滅菌器內殺菌消毒，開啟超凈工作臺后打開紫外線進行殺菌10-20min，待高壓殺菌后，取出培養基放置到超凈工作臺中，等培養基的溫度降到60-70℃左右，在無菌的條件下，將大腸桿菌接種到培養基中，接種好大腸桿菌繼續接種放線菌，然后放入生化培養箱中并將培養箱溫度調至37-38℃，培養8-10h；

第二步：芽孢桿菌及乳酸菌的培養：

稱取15g營養肉湯培養基于500ml蒸餾水中，經振蕩攪拌后放入立式壓力蒸汽滅菌器內殺菌消毒，開啟超凈工作臺后打開紫外線進行殺菌20-30min，待高壓殺菌后，取出培養基放置到超凈工作臺中，等培養基的溫度降到50-60℃左右，在無菌的條件下，將芽孢桿菌接種到培養基中，接種好芽孢桿菌后添加0.1-1g二乙基丙二酰脲溶液混勻，繼續接種乳酸菌后放入生化培養箱中并將培養箱溫度調至35-37℃，培養8-10h；

第三步：硫氧化菌及硝化細菌的培養：

將培養工作中需要用到的接種環和酒精燈以及其它器具放置到超凈工作臺中，開啟超凈工作臺，打開紫外燈，照射20-30min左右關閉紫外燈，將硫氧化菌制成的懸浮液在30-40℃，140-150r/min環境下于搖床中培養7d后添加硝化細菌繼續培養，培養結束后的懸浮液放置于0-4℃冰箱中保存備用；

第四步：混合培養：

待混合培養液中活菌數大于等于1×10⁸個/ml后，分別用移液器取出，然后按照大腸桿菌與放線菌：芽孢桿菌及乳酸菌：硫氧化菌及硝化細菌的重量比為3-5：1-2：1的比例接種到固體培養基中，混合均勻，共同置于37℃的培養箱中培養10-14h。

2.根據權利要求1所述的一種污泥處理復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述制備方法中的第一步中稱取15g營養肉湯培養基于500ml蒸餾水中，添加0.1-0.5g三環癸胺固體，經振蕩攪拌后放入立式壓力蒸汽滅菌器內殺菌消毒，開啟超凈工作臺后打開紫外線進行殺菌20min，待高壓殺菌后，取出培養基放置到超凈工作臺中，等培養基的溫度降到60℃左右，在無菌的條件下，將大腸桿菌接種到培養基中，接種好大腸桿菌繼續接種放線菌，然后放入生化培養箱中并將培養箱溫度調至37℃，培養10h。

3.根據權利要求1所述的一種污泥處理復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述制備方法第二步中稱取15g營養肉湯培養基于500ml蒸餾水中，經振蕩攪拌后放入立式壓力蒸汽滅菌器內殺菌消毒，開啟超凈工作臺后打開紫外線進行殺菌25min，待高壓殺菌后，取出培養基放置到超凈工作臺中，等培養基的溫度降到60℃左右，在無菌的條件下，將芽孢桿菌接種到培養基中，接種好芽孢桿菌后添加0.5-1g二乙基丙二酰脲溶液混勻，繼續接種乳酸菌后放入生化培養箱中并將培養箱溫度調至36℃，培養10h。

4.根據權利要求1所述的一種污泥處理復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述制備方法第三步中將培養工作中需要用到的接種環和酒精燈以及其它器具放置到超凈工作臺中，開啟超凈工作臺，打開紫外燈，照射25min左右關閉紫外燈，將硫氧化菌制成的懸浮液在40℃，140r/min環境下于搖床中培養7d后添加硝化細菌繼續培養，培養結束后的懸浮液放置于2℃冰箱中保存備用。

5.權利要求1所述的一種污泥處理復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述制備方法第四步中待混合培養液中活菌數大于等于1×10⁸個/ml后，分別用移液器取出，然后按照大腸桿菌與放線菌：芽孢桿菌及乳酸菌：硫氧化菌及硝化細菌的重量比為3-4：1.2-1.5：1的比例接種到固體培養基中，混合均勻，共同置于37℃的培養箱中培養12h。

6.權利要求1或2所述的一種污泥處理復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述三環癸胺固體的添加量以其有效成分計。

7.權利要求1或3所述的一種污泥處理復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于：所述二乙基丙二酰脲溶液為二乙基丙二酰脲的水溶液，質量濃度為1％，其添加量以二乙基丙二酰脲有效成分計。