[發(fā)明專利]TK基因缺失型的山羊痘病毒及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710570119.6
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107384961B
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林省凱博生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/863
• 分類號: C12N15/863;C12N7/01;A61K39/275;A61P31/20
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.TK基因缺失型的山羊痘病毒，其特征在于，其制備方法包括以下步驟：

1)將質(zhì)粒pGVTK和山羊痘病毒共轉(zhuǎn)染于山羊痘病毒宿主細(xì)胞中，通過熒光噬斑篩選獲得重組病毒中間體；

2)利用二次同源重組技術(shù)定向特異性敲除EGFP基因，將質(zhì)粒pGVTKα和重組病毒中間體共轉(zhuǎn)染于山羊痘病毒宿主細(xì)胞中，通過非熒光噬斑篩選，最終獲得TK基因缺失型的山羊痘病毒；

其中，質(zhì)粒pGVTK包含的核心元件依次為TK基因同源左臂、痘病毒通用早晚期啟動(dòng)子PE/L、熒光標(biāo)記基因、轉(zhuǎn)錄終止子和TK基因同源右臂，質(zhì)粒pGVTKα包含的核心元件依次為TK基因同源左臂、無意義序列和TK基因同源右臂；

所述TK基因同源左臂、右臂的核苷酸序列分別如SEQ ID No:1、5所示，所述無意義序列如SEQ ID No:6所示；

質(zhì)粒pGVTK和pGVTKα的出發(fā)載體均為pGH。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊痘病毒，其特征在于，所述山羊痘病毒包括GTPV-AV41。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊痘病毒，其特征在于，所述宿主細(xì)胞包括Vero細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山羊痘病毒，其特征在于，所述熒光標(biāo)記基因編碼的蛋白為增強(qiáng)型綠色熒光蛋白EGFP，所述轉(zhuǎn)錄終止子為T5NT。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的山羊痘病毒，其特征在于，所述痘病毒通用早晚期啟動(dòng)子PE/L、熒光標(biāo)記基因、轉(zhuǎn)錄終止子的核苷酸序列分別如SEQ ID No:2-4所示。

6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的山羊痘病毒在制備山羊痘疫苗中的應(yīng)用。

7.由權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的山羊痘病毒制備的山羊痘疫苗。