[發明專利]胚胎植入前染色體異常檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710569713.3
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107267628A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 梁波;孔令印;劉慧敏;冒燕;宣黎明;申靜靜
• 申請（專利權）人: 蘇州貝康醫療器械有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)32204
• 代理人: 柏尚春

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及一種胚胎植入前染色體異常檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

隨著我國環境污染以及生育年齡推遲，不孕不育率越來越高。據統計，國內平均每8對育齡夫婦中就有1對不能正常受孕，因此越來越多的人選擇輔助生殖技術，目前以試管嬰兒為代表的體外授精技術已經成為不孕不育治療的主流選擇。美國疾病控制與預防中心(CDC)統計了2004年到2013年間進行輔助生殖助孕的周期數，到2013年，美國輔助生殖年周期數接近16萬，其中進行試管嬰兒的周期占其中的99％。但目前為止，即使是技術最好的輔助生殖中心，活產率也只有30％左右。其主要原因是由于胚胎染色體異常而導致反復植入失敗，而通過對胚胎染色體進行植入前遺傳學篩查，選擇正常的胚胎進行移植，可以顯著地提高輔助生殖的成活率。

在試管嬰兒實施過程中，關鍵的一步是挑選出優質的胚胎進行植入，傳統的方法主要是胚胎形態學觀察，但是形態學觀察的結果易受觀察者主觀影響，且各醫療機構評分系統標準不統一，通過植入前遺傳學篩查可大大提高試管嬰兒的妊娠率和活產率。目前，臨床上進行植入前遺傳學篩查的方法主要包括Fish，Array CGH等，然而這兩種技術都存在一定的局限：FISH技術目前存在的問題在于通量低，一次只能檢測幾條染色體，且操作繁瑣，受到熒光信號的影響，分辨率低；ArrayCGH的缺點在于只能檢測已知的染色體異常，且在檢測過程中需要加入對照樣本，通過與對照樣本的信號對比進行結果的分析，這種方法極大的受限于雜交信號的影響。而利用半導體高通量測序法進行植入前遺傳學篩查，一次可以檢測全部23對染色體，通過構建正常樣本數據庫進行樣本分析，不需要每次檢測都加入正常對照，檢測的通量可達到25個樣本以上一個反應且檢測染色體異常的分辨率達到4M。該技術既彌補了FISH在準確度和檢測通量方面的缺陷，又降低了單個樣本的檢測成本，同時提高了檢測準確度，已經成為未來PGS檢測的發展方向。

不同檢測技術對比表

發明內容

本發明公開了一種胚胎植入前染色體異常檢測試劑盒，以解決現有技術存在的操作繁瑣，效率低下等問題。

本發明還要解決的技術問題是提供上述試劑盒的檢測方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

一種檢測胚胎植入前染色體異常檢測試劑盒，該試劑盒包括：單細胞擴增試劑、片段化試劑、文庫構建試劑、DNA純化試劑和陰陽性質控品；

其中，

所述的單細胞擴增試劑包括：細胞提取緩沖液310μl、細胞裂解緩沖液310μl、細胞裂解酶20μl、預擴增緩沖液300μl、預擴增酶20μl、擴增緩沖液1.5ml和擴增酶60μl；

所述的片段化試劑包括：片段化緩沖液120μl、片段化酶120μl和終止反應緩沖液300μl；

所述的文庫構建試劑包括：末端修復緩沖液550μl、末端修復酶27μl、連接緩沖液275μl、DNA連接酶55μl、PCR酶混合液2.6ml、PCR引物混合液137μl、P1接頭60μl、無核酸酶水3.8ml和特異性接頭1～25各8μl；

單細胞擴增試劑、片段化試劑、文庫構建試劑的主要組分如下表所示：

其中，

所述的DNA純化試劑包括：DNA純化磁珠20ml和DNA洗脫液7.8ml；

所述的陰陽性質控品包括：核型為21號染色體三體的陽性質控品1、核型為XO染色體異常的陽性質控品2和染色體正常的陰性質控品。

其中，所述的核型為21號染色體三體的陽性質控品由如下方法制備得到：

從核型為21號染色體三體的陽性細胞系樣本中取3～5個細胞，在-80℃下密封保存備用。

其中，所述的核型為21號染色體三體的陽性細胞系樣本由21三體核型細胞通過常規細胞培養方法進行復蘇和傳代培養所得。

其中，所述的核型為XO染色體異常的陽性質控品由如下方法制備得到：

從核型為XO染色體異常的陽性細胞系樣本中取3～5個細胞，在-80℃下密封保存備用。

其中，所述的核型為XO染色體異常的陽性細胞系樣本由XO核型細胞通過常規細胞培養方法進行復蘇和傳代培養所得。

其中，所述的染色體正常的陰性質控品由如下方法制備得到：