[發(fā)明專利]一種臍帶干細(xì)胞除皺劑及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710568827.6
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號(hào): CN107519126B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉俊;李陶;林詞雄;王旭;林潔璇;朱剛
• 申請（專利權(quán)）人: 沃昕生物科技（深圳）有限公司
• 主分類號(hào): A61K8/99
• 分類號(hào): A61K8/99;A61K8/49;A61K8/65;A61K8/73;A61Q19/08;C12N5/0775
• 代理公司: 北京睿派知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11597
• 代理人: 劉鋒

1.一種臍帶干細(xì)胞除皺劑，其特征在于，包括以下成分：臍帶干細(xì)胞、透明質(zhì)酸、膠原蛋白和蘋果原花青素；

其中，所述臍帶干細(xì)胞的密度為3×10⁷個(gè)/mL，且臍帶干細(xì)胞為第三代至第五代的臍帶干細(xì)胞；所述蘋果原花青素的濃度為8mg/mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種臍帶干細(xì)胞除皺劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（一）臍帶干細(xì)胞的分離培養(yǎng)

S1、以DMEM/F12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入血小板裂解物、bFGF、L-谷氨酰胺，使血小板裂解物、bFGF、L-谷氨酰胺的終濃度分別為5%、50ng/ml、4mM/ml，4度避光保存?zhèn)溆茫?/p>

S2、將臍帶組織轉(zhuǎn)移到無菌采集瓶中，以2-8攝氏度保存；

S3、將臍帶從臍帶采集瓶中取出，浸泡清洗，然后用手術(shù)刀切除雙側(cè)手術(shù)線結(jié)扎及淤血部分，然后用含有雙抗的生理鹽水沖洗3遍，去除血污，其中，所述雙抗具體為1%青霉素和1%鏈霉素；

S4、將清洗干凈的臍帶置于大號(hào)培養(yǎng)皿中，均分成幾部分，平均每部分3-4cm，并對(duì)每一小部分沿縱向進(jìn)行分離，使臍帶組織管狀變?yōu)槠瑺睿賹⑵瑺钅殠ЫM織進(jìn)行進(jìn)一步的分離，切割為2-3mm²；

S5、用吸管將組織植入T75培養(yǎng)瓶中，密度為20-25塊/瓶，稍稍傾斜培養(yǎng)瓶去除吸取組織時(shí)帶進(jìn)去的生理鹽水，并將組織塊均勻地鋪在培養(yǎng)瓶中，置37攝氏度、5%CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)， 30min后組織塊將貼壁于培養(yǎng)面，輕柔地加入6-9ml含5%血小板裂解物的DMEM/F12培養(yǎng)基浸潤組織塊，一天后進(jìn)行全量換液，以后每2-3天進(jìn)行半量換液，第9天時(shí)刮除組織塊；

S6、細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞融合度達(dá)80%-90%時(shí)，去除培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，用生理鹽水沖洗2次，加入0.25%EDTA-胰酶進(jìn)行消化，待細(xì)胞變圓時(shí)加入等體積完全培養(yǎng)基終止消化，收集離心后，用適量完全培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為0.5×10⁵/ml進(jìn)行傳代，當(dāng)P1代細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí)，調(diào)整細(xì)胞密度為0.5×10⁵/ml進(jìn)行傳代，后續(xù)均按此標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行傳代培養(yǎng)；

（二）完成制備

將透明質(zhì)酸、膠原蛋白、蘋果原花青素溶于生理鹽水，并利用0.2μm濾膜進(jìn)行過濾；在過濾后的溶液中加入臍帶干細(xì)胞，重懸臍帶干細(xì)胞，制備得到臍帶干細(xì)胞除皺劑；

其中，所述臍帶干細(xì)胞的密度為3×10⁷個(gè)/mL，且臍帶干細(xì)胞為第三代至第五代的臍帶干細(xì)胞；所述蘋果原花青素的濃度為8mg/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種臍帶干細(xì)胞除皺劑的制備方法，其特征在于：所述步驟S1-S4需在12小時(shí)內(nèi)完成。