[發明專利]一種高爾基銀染神經組織的冰凍切片方法

有效

• 申請號: 201710568588.4
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107271241B
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發明（設計）人: 劉鐳;楊昭云;李卉;魏稼黎;鐘峰;戴如平
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅二醫院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 長沙朕揚知識產權代理事務所(普通合伙) 43213
• 代理人: 何湘玲;周孝湖

本發明公開了一種高爾基銀染神經組織的冰凍切片方法，包括以下步驟：(1)配制高爾基銀染溶液；(2)將待染色的神經組織浸泡在步驟(1)所述高爾基銀染溶液中；(3)將浸泡好的神經組織置于含甘油10％～20％V/V、含蔗糖15％～20％W/V的甘油?蔗糖混合溶液中進行脫水；(4)利用冰凍切片機將脫水后的神經組織進行切片。該冰凍切片方法采用含甘油10％～20％V/V、含蔗糖15％～20％W/V的甘油?蔗糖混合溶液對銀染神經組織進行脫水處理，降低了神經組織的硬度和脆性，增強了其韌性，所制得的神經組織切片質量好，切片完整，有效減少了切片破碎和粘刀的情況，并且成本低，不影響組織顯影。

技術領域

本發明涉及神經病理學組織切片技術領域，具體涉及一種高爾基銀染神經組織的冰凍切片方法。

背景技術

已有的科學研究表明，神經元是大腦神經系統的結構單位和功能單位。神經元的基本結構包括細胞體和突起兩部分；神經元的突起一般包括一條長而分支少的軸突和數條短而呈樹枝狀分支的樹突；樹突和軸突具有接受刺激并將沖動傳入細胞體的功能。神經元由樹突間神經突觸連接構筑了復雜的神經網絡，并由此來傳遞神經信號。

樹突表面可見許多棘狀突起，長約0.5μm～1.0μm，粗約0.5μm～2.0μm，稱樹突棘，是形成突觸的部位，與突觸可塑性直接相關。神經元結構中的胞體位置、樹突以及樹突棘形態和分布，是描述神經元的重要參數。觀察神經元的樹突及樹突棘結構的改變，有助于深入地理解腦結構，對解釋大腦復雜的功能基礎和神經疾病的病變機理提供了直接證據。

在組織學染色領域，高爾基銀染法是目前應用最為廣泛的一種觀察神經元形態的染色方法，可以用來分析神經元的樹突結構和樹突棘形態。其結果穩定，可重復性好，染色清晰，并且組織切片厚度在200μm左右時可以清晰的顯示整個神經元樹突的形態。

但是，該方法處理后的神經組織通常硬而脆，冰凍切片過程容易成碎片，通常需要使用振動切片。而振動切片相對于冰凍切片而言，不僅切片速度慢，存在刀痕而導致切片質量較差，而且應用范圍窄，僅能對部分類型的組織標本進行切片，相當多種類的組織仍不能進行振動切片，需要冰凍切片。因此，目前裝備有振動切片機的單位或實驗室很少，而幾乎所有的病理檢查實驗室或單位均裝備有冰凍切片機。沒有裝備振動切片機的單位或實驗室如果進行高爾基染色，只能購買成品的試劑盒，如FD公司和Hito公司提供可冰凍切片的高爾基銀染試劑盒，但是售價昂貴，染色成本高。

發明內容

本發明的目的在于，克服以上背景技術中提到的不足和缺陷，提供一種切片質量好、成本低的高爾基銀染神經組織的冰凍切片方法。

為解決上述技術問題，本發明提出的技術方案為：

一種高爾基銀染神經組織的冰凍切片方法，包括以下步驟：

(1)配制高爾基銀染溶液；

(2)將待染色的神經組織浸泡在步驟(1)所述高爾基銀染溶液中；

(3)將浸泡后的神經組織置于含甘油10％～20％(V/V)、含蔗糖15％～20％(W/V)的甘油-蔗糖混合溶液中進行脫水；

(4)利用冰凍切片機將脫水后的神經組織進行切片。