[發明專利]一種熒光定量檢測FSH的免疫層析試劑條及其制備方法

在審

• 申請號: 201710568471.6
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107167596A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 胡鹍輝;夏福臻;錢純亙;張賽;宋永波
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司44218
• 代理人: 袁燕清

技術領域

本發明屬于免疫診斷技術領域，具體涉及一種熒光定量檢測促卵泡生成素（FSH）的免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

促卵泡生成素（FSH）是一種糖蛋白激素，帶有兩個亞基。α亞基類似于黃體生成素（LH）、人絨毛膜促性腺激素（hCG）以及促甲狀腺激素（TSH）的α亞基。β亞基不同于其他糖蛋白激素的β亞基，并顯示出其特殊的生物化學特性。

對于女性，FSH在下丘腦-垂體-卵巢調節環路中發揮作用，控制月經周期。FSH和LH從垂體的促性腺細胞中陣發性釋放，血中的濃度由類固醇類激素通過下丘腦的負反饋機制控制。在卵巢中FSH和LH一起刺激卵泡的成熟，進而刺激卵泡中雌激素的生物合成。FSH水平在月經周期的中期呈現一高峰，但不如LH明顯，由于卵巢功能的變化和雌激素水平的下降，絕經期FSH達到高水平。FSH的水平會因絕經期、閹割以及卵巢早衰的影響而上升。FSH和LH或FSH和雌激素濃度出現異常時，可能為神經性厭食癥或多囊卵巢疾病。

對于男性，FSH能夠調節細精管的發育以及精子發生過程。與雌激素不同，雄性激素不能降低FSH的水平，男性體內的FSH水平只受血清中LH的調節。少精癥和無精子癥的患者通常會出現FSH升高，睪丸腫瘤患者血清的FSH濃度一般會下降，男性體內出現高水平FSH時，可能為先天性睪丸發育不全或原發性睪丸衰竭。

目前臨床上FSH的檢測方法有酶聯免疫法（ELISA）、化學發光法和膠體金免疫層析法等，這些方法都有各自的優點和不足。ELISA法檢測步驟多、耗時長，操作過程的影響因素較多，易造成假陽性和假陰性結果。因此目前逐步被化學發光法替代，但這類方法為全封閉系統，價格昂貴，需要專門培訓儀器使用人員，維修及檢測成本高，并且不適合單人份和小批量檢測用，目前不利于FSH檢測在國內的廣泛開展，膠體金法操作簡單、適合單人份檢測，但測試結果只能通過肉眼觀察，給出定性或半定量結果。

鑒于目前尚無快速、準確的定量檢測FSH的方法，本發明的目的是提供一種可用于快速定量檢測FSH的免疫層析試紙條，用于評估和監測體內促卵泡生成素的水平，所述試劑具有操作簡單、方便快捷、經濟、準確定量等優點，更適用于在各醫療機構廣泛開展。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術中存在的不足，提供一種操作簡單、方便快捷、經濟、測定準確的FSH檢測試紙條。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種熒光定量檢測FSH的免疫層析試紙條，由樣品墊、標記墊、包被膜、吸水紙順次搭接在PVC底板上構成，所述的標記墊和所述的樣品墊相接，所述的包被膜和所述的標記墊相接，所述的吸水紙和所述的包被膜相接；所述標記墊上噴涂有熒光微球標記的FSH單克隆抗體和熒光微球標記的親和素；所述包被膜包含檢測線和質控線，檢測線和質控線間隔4~8 mm，所述檢測線包被有與所述熒光微球標記的FSH單克隆抗體處于不同表位的另一種FSH單克隆抗體。所述質控線包被有特異性識別親和素的兔抗親和素抗體。

優選地，所述熒光微球標記的FSH單克隆抗體的濃度為0.1~1.0 mg/mL，稀釋比例為5%~20%。

所述熒光微球標記的親和素的濃度為0.1~1.0 mg/mL，稀釋比例為0.5%~5%。所述含熒光微球標記的FSH單克隆抗體和熒光微球標記的親和素的標記墊處理液的噴量為3~6 μL/cm。

優選地，所述熒光微球的粒徑為100~500 nm。所述熒光微球的激發波長為310~550 nm，發射波長為340~ 620 nm。

優選地，所述包被膜檢測線上包被的FSH單克隆抗體的濃度為0.5~2 mg/mL，噴量0.1~0.2μL/mm。

所述質控線上包被的兔抗親和素抗體的濃度為0.5~2 mg/mL，噴量0.1~0.2μL/mm。

本發明還提供一種熒光定量檢測FSH的免疫層析試紙條的方法，包括以下步驟：

（1）熒光微球標記蛋白的制備