[發明專利]一種熒光定量檢測FSH的免疫層析試劑條及其制備方法

在審

• 申請號: 201710568471.6
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107167596A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 胡鹍輝;夏福臻;錢純亙;張賽;宋永波
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司44218
• 代理人: 袁燕清

1.一種熒光定量檢測FSH的免疫層析試紙條，所述的免疫層析試紙條包括有PVC底板，其特征在于，所述的PCV底板上依次設有樣品墊、標記墊、包被膜、吸水紙，所述的標記墊和所述的樣品墊相接，所述的包被膜和所述的標記墊相接，所述的吸水紙和所述的包被膜相接；所述標記墊上噴涂有熒光微球標記的FSH單克隆抗體和熒光微球標記的親和素；所述包被膜包含檢測線和質控線，檢測線和質控線間隔4~8 mm，所述檢測線包被有與所述熒光微球標記的FSH單克隆抗體處于不同表位的另一種FSH單克隆抗體，所述質控線包被有特異性識別親和素的兔抗親和素抗體。

2.如權利要求1所述的免疫層析試紙條, 其特征在于，熒光微球的粒徑為100~500 nm。

3.如權利要求4所述的免疫層析試紙條, 其特征在于，所述熒光微球的激發波長為310~550 nm，發射波長為340~ 620 nm。

4.一種熒光定量檢測FSH的免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包含有如下步驟：

（1）熒光微球標記蛋白的制備

取熒光微球，10000~15000 rpm第一次離心5~15分鐘，第一次離心得到沉淀物用10~100 mM、pH 6.0~7.0磷酸鹽緩沖液調節濃度為0.1%~1%，并超聲分散；加入終濃度為0.1~5 mg/mL的碳二亞胺，混勻，再加入終濃度為0.1~5 mg/mL的N-羥基琥珀酰亞胺，混勻；室溫孵育20~40分鐘后10000~15000 rpm第二次離心5~15分鐘，第二次離心分離得到沉淀物用10~100 mM、pH 6.0~7.0磷酸鹽緩沖液溶解，將復溶后的熒光微球超聲分散，按照0.1~1.0 mg/mL熒光微球的比例分別加入FSH單克隆抗體和親和素，混勻后室溫旋轉混合反應1.5~3小時，10000~15000 rpm第三次離心5~15分鐘，第三次離心分離得到的沉淀物用10~40mM、pH 為7.0-8.0含10~40 mM乙醇胺和0.05%-1%酪蛋白的Tris-HCl復溶，超聲分散后旋轉混合反應0.5~1小時，10000~15000 rpm第四次離心5~15分鐘，第四次離心分離得到的沉淀物用微球保存液復溶，2~8℃保存；

（2）樣品墊的預處理

將樣品墊用封閉液浸泡后，置于濕度＜20%的40~50℃的烘箱，干燥12~24 h后于2~30℃密封保存；所述封閉液含0.1~1%的Tris、0.1~1%的Triton X-100、0.1~1%的BSA、0.1~2%的PEG 6000和0.005~0.05%的鼠抗人紅細胞；

（3）標記墊的制備

將熒光微球標記的FSH單克隆抗體和熒光微球標記的親和素用標記墊處理液噴涂在標記墊上；所述標記墊處理液中含有0.2~2%的酪蛋白，5%~20%的蔗糖，0.1~1%的Tween-20，0.1~0.5%的PEG20000，0.02~0.05%的Proclin300，0.01~0.05M、pH 8.0的Tris-HCL緩沖液，將制備好的標記墊置于濕度＜20%的40~50℃的烘箱，干燥12~24 h后于2~30℃密封保存；

（4）包被膜的制備

分別將另一FSH單克隆抗體和兔抗親和素用包被緩沖液調節其濃度為0.5~2 mg/mL，將FSH單克隆抗體噴到包被膜上的檢測線，將兔抗親和素抗體噴到包被膜上的質控線，所述FSH單克隆抗體和兔抗親和素抗體的用量按膜包被液量均為0.1~0.2 μL/mm，檢測線和質控線間隔4~8 mm，濕度＜20%的40~50℃的烘箱，干燥24~72 h后于2~30℃密封保存，備用；

（5）在底板上順次相互搭接地黏貼樣品墊、標記墊、包被膜和吸水紙得到試紙板，按照切割要求切割成3~4 mm寬度的試紙條。

5.如權利要求4所述的免疫層析試紙條的制備方法, 其特征在于，所述熒光微球標記的FSH單克隆抗體的濃度為0.1~1.0 mg/mL，按照稀釋比例為5%~20%稀釋后，噴量為3~6 μL/cm噴涂至標記墊上。

6.如權利要求4所述的免疫層析試紙條的制備方法, 其特征在于，所述熒光微球標記的親和素的濃度為0.1~1.0 mg/mL，按照稀釋比例為0.5%~5%稀釋后，噴量為3~6 μL/cm噴涂至標記墊上。