[發明專利]一種熒光定量檢測PAPP?A的免疫層析試劑條及其制備方法

在審

• 申請號: 201710568470.1
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107328942A
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 錢純亙;鄒暢;夏福臻;張賽;胡鹍輝;宋永波
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司;深圳市人民醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司44218
• 代理人: 袁燕清

技術領域

本發明屬于免疫診斷技術領域，具體涉及一種熒光定量檢測妊娠相關蛋白A（PAPP-A）的免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

妊娠相關蛋白A（pregnancy associated plasma protein A，PAPP-A）是由胎盤衍生出來的一種大分子糖蛋白，由胎盤合體滋養層細胞，蛻膜細胞及正常月經周期子宮內膜間質細胞合成并分泌到血清中，它的濃度隨著孕周增加而升高，直至足月。已經證明在孕早期懷有唐氏綜合癥（DS）胎兒的孕婦血清中PAPP-A濃度顯著下降，因此PAPP-A被廣泛認可為DS篩查的有效指標，它的濃度降低提示新生兒患唐氏綜合征風險增高。

目前有資料表明另外一種形式的PAPP-A蛋白大量存在于不穩定冠狀動脈粥樣硬化斑塊中。同時，PAPP-A在心血管疾病的診斷和急性冠脈綜合癥（ACS）患者預后判斷方面也具有一定價值。研究顯示 PAPP-A 參與血管的修復過程及動脈粥樣硬化損傷的進展, 并與斑塊的不穩定性和破裂密切相關。因此患者血液中PAPP-A的檢測將可能對動脈粥樣硬化斑塊破裂的早期預測非常有幫助。

PAPP-A可廣泛用于ICU病房、血液科、腫瘤科、兒科、早產兒及新生兒監護室、外科、內科、器官移植科、急診科和治療實驗室等。

目前臨床上PAPP-A的檢測方法有放射免疫檢測（RIA）、酶聯免疫法（ELISA）和化學發光法等，這些方法都有各自的優點和不足。放射免疫檢測靈敏度高、特異性強，但該方法對人體有放射性損傷，目前在臨床應用已較少。ELISA法檢測步驟多、耗時長，操作過程的影響因素較多，易造成假陽性和假陰性結果。因此目前逐步被化學發光法替代，但這類方法為全封閉系統，價格昂貴，需要專門培訓儀器使用人員，維修及檢測成本高，并且不適合單人份和小批量檢測用，目前不利于PAPP-A檢測在國內的廣泛開展。

鑒于目前尚無快速、準確的定量檢測PAPP-A的方法，本發明的目的是提供一種可用于快速定量檢測PAPP-A的免疫層析試紙條，用于評估和監測體內妊娠相關蛋白A的水平，所述試劑具有操作簡單、方便快捷、經濟、準確定量等優點，更適用于在各醫療機構廣泛開展。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術中存在的不足，提供一種操作簡單、方便快捷、經濟、測定準確的PAPP-A檢測試紙條。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種熒光定量檢測PAPP-A的免疫層析試紙條，由樣品墊、標記墊、包被膜、吸水紙順次搭接在PVC底板上構成，所述標記墊上噴涂有熒光微球標記的PAPP-A單克隆抗體和熒光微球標記的親和素；所述包被膜包含檢測線和質控線，所述檢測線包被有與所述熒光微球標記的PAPP-A單克隆抗體處于不同表位的另一種PAPP-A單克隆抗體。所述質控線包被有特異性識別親和素的兔抗親和素抗體。

優選地，所述熒光微球標記的PAPP-A單克隆抗體的濃度為0.1~1.0 mg/mL，稀釋比例為5%~20%。所述熒光微球標記的親和素的濃度為0.1~1.0 mg/mL，稀釋比例為0.5%~5%。所述含熒光微球標記的PAPP-A單克隆抗體和熒光微球標記的親和素的標記墊處理液的噴量為3~6 μL/cm。

優選地，所述熒光微球的粒徑為100~500 nm。所述熒光微球的激發波長為310~550 nm，發射波長為340~ 620 nm。

優選地，所述包被膜檢測線上包被的PAPP-A單克隆抗體的濃度為0.5~2 mg/mL，噴量0.1~0.2μL/mm。所述質控線上包被的兔抗親和素抗體的濃度為0.5~2 mg/mL，噴量0.1~0.2μL/mm。

本發明還提供一種熒光定量檢測PAPP-A的免疫層析試紙條的方法，包括以下步驟：

（1）熒光微球標記蛋白的制備