[發明專利]一種基于豬非典型瘟病毒E2基因的熒光定量RT?PCR檢測試劑盒在審
| 申請號： | 201710566448.3 | 申請日： | 2017-07-12 |
| 公開（公告）號： | CN107267666A | 公開（公告）日： | 2017-10-20 |
| 發明（設計）人： | 寧章勇;劉健新;許古明;郭世寧;葛士坤;任旭皎 | 申請（專利權）人： | 華南農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司44102 | 代理人： | 單香杰 |
| 地址： | 510630 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 非典型 瘟病 e2 基因 熒光 定量 rt pcr 檢測 試劑盒 | ||
1.一對檢測豬非典型瘟病毒的特異性熒光定量RT-PCR檢測引物，其特征在于，包括PCR上游引物和PCR下游引物，引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～2所示。
2.權利要求1所述的檢測豬非典型瘟病毒的特異性熒光定量RT-PCR檢測引物在制備豬非典型瘟病毒的檢測試劑盒中的應用。
3.一種基于豬非典型瘟病毒E2基因的熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述的檢測引物。
4.根據權利要求3所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含反轉錄反應所需試劑，熒光定量PCR所需試劑，DEPC處理水，陽性對照和陰性對照。
5.根據權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為含有APPV E2基因片段的T載體克隆，陰性對照為DEPC處理水。
6.根據權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述反轉錄反應所需試劑為5×PrimeScript RT Master Mix，熒光定量PCR所需試劑為：SYBR Premix Ex Taq II。
7.根據權利要求3至6任一所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒檢測病毒的10μl反轉錄反應的體系為：5×PrimeScript RT Master Mix 2μl，總RNA﹤500ng，用DEPC處理水補齊到10μl。
8.根據權利要求3至6任一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒檢測病毒的20μl的熒光定量PCR反應檢測體系為：SYBR Premix Ex Taq II 10ul，PCR上游引物0.8μl，PCR下游引物0.8μl，DNA模板﹤100ng，用DEPC處理水補齊到20μl。
9.根據權利要求3至6任一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反轉錄反應的條件為：37 ℃反應15 min，85℃反應5 sec。
10.根據權利要求3至6任一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的熒光定量PCR反應條件為：預變性：95℃反應30 sec；PCR：95℃反應5 sec，60℃反應30 sec，40個循環；溶解：95℃反應5 sec，60℃反應1 min。
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