[發明專利]體外重折疊波形蛋白的方法及其應用

有效

• 申請號: 201710565618.6
• 申請日: 2017-07-12
• 公開（公告）號: CN107344963B
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 張雁;楊春雨;勞滔滔;林潮喜
• 申請（專利權）人: 深圳市倍諾博生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/00;G01N21/19;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.體外重折疊野生型或突變型波形蛋白的方法，包括以下步驟：

使重組表達獲得的野生型或突變型波形蛋白制備物與pH為8的包含尿素和二硫蘇糖醇的緩沖液接觸以溶解所述制備物，并獲得蛋白溶液，其中所述緩沖液中尿素的濃度為8M，二硫蘇糖醇的濃度為10mM；以及

在氧化還原混合物存在下，通過透析法階段式降低蛋白溶液中尿素的濃度，以重折疊野生型或突變型波形蛋白，其中階段式降低蛋白溶液中尿素的濃度包括通過透析法將所述包含尿素和二硫蘇糖醇的緩沖液中尿素的濃度階段性地降低至初始濃度的50％、25％和0％，其中使用包含尿素并且尿素的濃度梯度降低的三種透析液，所述三種透析液中尿素的濃度分別為所述包含尿素和二硫蘇糖醇的緩沖液中尿素的濃度的50％、25％和0％；

其中所述突變型波形蛋白為相對于人野生型波形蛋白，在16和59位氨基酸殘基突變為精氨酸。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述野生型或突變型波形蛋白制備物通過以下步驟獲得：

使宿主細胞表達野生型或突變型波形蛋白；

裂解宿主細胞，獲得包涵體形式的野生型或突變型波形蛋白制備物。

3.如權利要求1-2中任一項所述的方法，其中所述氧化還原混合物為還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽。

4.如權利要求3所述的方法，其中還原型谷胱甘肽與氧化型谷胱甘肽的比例為10:1。

5.包含以下的試劑盒在體外重折疊野生型或突變型波形蛋白中的用途：pH為8、包含濃度為10mM的二硫蘇糖醇和濃度為8M的尿素的緩沖液，以及包含尿素并且尿素的濃度梯度降低的三種透析液，所述三種透析液中尿素的濃度分別為所述包含二硫蘇糖醇和尿素的緩沖液中尿素的濃度的50％、25％和0％。

6.如權利要求5所述的用途，其中所述試劑盒還包含氧化還原混合物。

7.如權利要求6所述的用途，其中所述氧化還原混合物為還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽。

8.如權利要求7所述的用途，其中還原型谷胱甘肽與氧化型谷胱甘肽的比例為10:1。

9.如權利要求5所述的試劑盒，其中所述包含二硫蘇糖醇和尿素的緩沖液還包含300mMNaCl和1mM EDTA。