[發明專利]一種缺陷性分支桿菌以及利用其制備去氫表雄酮的方法

在審

• 申請號: 201710565607.8
• 申請日: 2017-07-12
• 公開（公告）號: CN107267418A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 陽飛;蘇正定;賀一君;系祖斌;盧方欣;張華山;成細瑤
• 申請（專利權）人: 湖北共同生物科技有限公司;湖北工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P33/06;C07J1/00;C12R1/32
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技術領域

本發明涉及甾體類藥物中間體的生產技術領域，具體涉及一種3β-羥基氧化酶系缺陷性分支桿菌以及利用該菌制備去氫表雄酮的方法。

背景技術

去氫表雄酮(dehyroepiandrosterone，DHEA)是一種C19類固醇載體化合物。化學名稱為3β-羥基-雄甾-5-烯-17-酮，分子式C₁₉H₂₈O₂，CAS編號：53-43-0，分子量為288.43，結構式如下：

DHEA是人體內血漿中含量最多的皮質類固醇激素。血清中DHEA大部分以硫酸結合物(DHEA-s)的形式存在，是人體腎上腺皮質網狀層分泌的一種腎上腺激素硫酸DHEA(DHEAS)的前體物質。二氫膽固醇在腎上腺皮質王狀層細胞內經以細胞色素P450為主的酶系作用下轉變為DHEA、DHEA經硫代激酶催化轉化成DHEA-S。大約90％血循環中DHEA-S來自腎上腺皮質網狀帶。與其它甾體類激素不同，血漿中DHEA及DHEAS隨著年齡的增長濃度下降明顯。研究證實，去氫表雄酮及其轉化產物具有廣泛生理活性，在美國、法國等已經開始將其用于臨床。去氫表雄酮在抗腫瘤、保護中樞神經系統、調節等方面具有廣泛的藥理活性。而大量研究證明，DHEA是人血漿中大量共存在的腎上腺甾體化合物、具有抗炎、抗增殖及抗抑郁等活性，其衍生物在動物實驗中能促進免疫應答，而且具有很好的神經保護作用。

DHEA作為中間體合成許多有重要生理活性的甾體化合物，具有抗衰老及蛋白同化作用。這類激素類藥物的主要功能包括延緩衰老；增強體能；改善情緒和睡眠,提高記憶力；改善性功能,提高性欲；調節免疫系統功能,提高肌體免疫力；減肥作用；輔助癌癥及其他疾病。但DHEA的化學合成具有一定的難度，所以利用DHEA為底物進行生物轉化一直是人們研究的熱點。

現有文獻的去氫表雄酮的制備工藝大多采用化學工藝來合成，是先用植物甾醇發酵生產為4-雄烯二酮(4-AD)，然后利用化學方法得到去氫表雄酮。中國專利申請號為201110085711X、2016102462663、2015104163587、2013100974201、 2012100380942、2009102730277、201210010445.9等文獻，采用雙烯醇酮為原料，分為3步化學反應完成。這類方法存在以下缺陷：(1)大多以苯或鹵代烷為介質，毒性大，導致藥品存在安全隱患；(2)原料價格昂貴，生產成本高；(3)制備步驟繁瑣,且制備過程中使用有機溶劑導致產品純度低,后期提純操作繁瑣,生產效率低。

在一定程度上,化學合成法的大力投資造就了只有先制備4-雄烯二酮 (4-AD)、然后制備去氫表雄酮的方法的認識。中國專利申請201210038094和 22016101251400中公開了利用4-AD制備去氫表雄酮的方法。即植物甾醇先發酵生產為4-AD，然后利用化學方法得到去氫表雄酮。這是現在研究利用植物甾醇制備去氫表雄酮的方法，其存在反應路線較長、多步反應使得去氫表雄酮的生產成本較大，且由于反應步驟多、各步損耗較大、總收率較小。中國專利申請 201610439697.1報道以4-雄烯二酮為初始底物，依次進行化學法和酶法兩步制得去氫表雄酮。采用了酮還原酶作為催化劑，使得制備步驟縮短，但同時在整個反應過程中輔酶和叔丁醇鉀等原料的用量大，成本高。