[發明專利]具有高抗原呈遞的DC細胞和抗原特異性T細胞及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710562430.6
• 申請日: 2017-07-11
• 公開（公告）號: CN107217041B
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 劉韜;陳雪梅;周美玲
• 申請（專利權）人: 深圳華云生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/0783;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 李艷麗

本發明公開了一種具有高抗原呈遞的DC細胞和抗原特異性T細胞及其制備方法和應用。在DC細胞上負載抗原，并向DC細胞內轉染基因表達沉默劑得到所述具有高抗原呈遞的DC細胞。在DC細胞與T細胞共同培養的過程中加入四環素調控DC細胞內的基因表達沉默劑的開關，使得DC細胞和T細胞相互接觸并形成免疫突觸結構的過程中抑制DC細胞內具有負調控作用的Tao?1蛋白磷酸激酶的基因表達，增加免疫突觸形成的時間和強度，提高形成的免疫突觸的穩定性。結果表明，上述具有高抗原呈遞的DC細胞與T細胞之間的抗原呈遞效率更高，能夠刺激獲得更成熟、更活化、更具抗原特異性的T細胞。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種具有高抗原呈遞的DC細胞和抗原特異性T細胞及其制備方法和應用。

背景技術

近年來，自體免疫細胞治療腫瘤成為繼手術、放療、化療后最有前景的腫瘤治療方法。DC細胞(Dendritic cell，樹突狀細胞)是人體已知的最重要的抗原呈遞細胞，在介導腫瘤抗原特異性細胞免疫及腫瘤免疫應答方面所起的作用成為人們研究之熱點。DC細胞介導的腫瘤特異性抗原呈遞及T細胞免疫應答，既是腫瘤發病早期機體對抗腫瘤的有效手段，也是腫瘤發生免疫逃逸的重要機制。

在體內DC細胞與T細胞(Thymus-dependent lymphocyte，胸腺依賴性淋巴細胞)進行抗原傳遞的過程中有一個關鍵的步驟：形成免疫突觸(Immunologic synapse，IS)結構。免疫突觸的結構請參閱圖1，具體形成過程如下：大量T細胞游走于淋巴結等淋巴器官，當T細胞遇到DC細胞時其運動速度減低并被DC細胞捕獲，接受外源信號后T細胞發生極化反應，T細胞產生偽足，并形成適合分子信號傳遞的三維空間結構。細胞質內以微管組織中心(Microtubule organization center,MTOC)移動到靠近DC細胞的一側邊緣為基本特征的一系列細胞器重組變化發生，其表面粘附分子通過受體－配體相互作用得以緊密接觸DC細胞，形成了一個臨時性結構，該結構以TCR-MHC-抗原肽三元結構為簇狀中心，周圍環形分布著粘附分子，該結構即為免疫突觸(Immunologic synapse，IS)結構。

然而，目前體外培養的DC細胞-T細胞之間存在抗原呈遞效率不高，T細胞特異性免疫應答效果不理想等缺陷。

發明內容

基于此，有必要提供一種能夠制備抗原呈遞效率高的具有高抗原呈遞的DC細胞的制備方法以及一種能夠提高T細胞特異性免疫應答效果的抗原特異性T細胞的制備方法。

一種具有高抗原呈遞的DC細胞的制備方法，包括以下步驟：

提供DC細胞；

在所述DC細胞上負載抗原；以及

向所述DC細胞內導入基因表達沉默劑，所述基因表達沉默劑用于沉默Tao-1蛋白磷酸激酶基因的表達，得到所述具有高抗原呈遞的DC細胞。

在一個實施方式中，所述基因表達沉默劑為所述Tao-1蛋白磷酸激酶的shRNA。

在一個實施方式中，所述Tao-1蛋白磷酸激酶的shRNA的正義鏈的堿基序列如SEQID No.1所示，所述Tao-1蛋白磷酸激酶的shRNA的反義鏈的堿基序列如SEQ ID No.2所示。

一種具有高抗原呈遞的DC細胞，所述具有高抗原呈遞的DC細胞通過上述具有高抗原呈遞的DC細胞的制備方法制備得到。

一種抗原特異性T細胞的制備方法，包括以下步驟：

提供DC細胞；

在所述DC細胞上負載抗原；

向所述DC細胞內導入基因表達沉默劑，所述基因表達沉默劑用于沉默Tao-1蛋白磷酸激酶基因的表達，得到具有高抗原呈遞的DC細胞；