[發明專利]含活細胞的組織工程皮膚及其制備方法

有效

• 申請號: 201710562163.2
• 申請日: 2017-07-11
• 公開（公告）號: CN107320781B
• 公開（公告）日: 2020-03-10
• 發明（設計）人: 劉少輝;車七石
• 申請（專利權）人: 廣州潤虹醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: A61L27/40
• 分類號: A61L27/40;A61L27/38;A61L27/22;A61L27/20;A61L27/36;A61L27/50;A61L27/54;A61L27/58;A61L27/60
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

1.一種含活細胞的組織工程皮膚，其特征在于，包括表皮層、仿真皮層和真皮層，所述的仿真皮層包括角朊細胞、成纖維細胞和生物支架材料，其中角朊細胞與成纖維細胞的密度比為0.1-0.2:1；所述的生物支架材料由明膠、殼聚糖、谷酰胺肽和透明質酸按質量比6-7:1.5-2:0.5-1:1組成。

2.如權利要求1所述的含活細胞的組織工程皮膚，其特征在于，所述的仿真皮層的制備方法為：在4℃條件下，將生物支架材料與DMEM培養基按體積比1:1混合后，加入表皮細胞生長因子與堿性成纖維生長因子，接種成纖維細胞和角朊細胞的混合液，兩種細胞接種總密度為2×10⁶/ml，其中角朊細胞與成纖維細胞的密度比為0.1-0.2:1，37℃，5％CO₂孵箱中培養4-5天，然后置于培養皿中進行固化，形成仿真皮層；所述的表皮細胞生長因子、堿性成纖維生長因子與DMEM培養基的用量比為2-3ng:12-15ng:1ml。

3.如權利要求1所述的含活細胞的組織工程皮膚，其特征在于，所述的生物支架材料由明膠、殼聚糖、谷酰胺肽和透明質酸按質量比6.5:1.75:0.75:1組成。

4.如權利要求1或3所述的含活細胞的組織工程皮膚，其特征在于，所述的生物支架材料的制備方法為：在50℃條件下，將明膠配置成質量分數為10％明膠水溶液，將殼聚糖溶于質量分數為2％的醋酸溶液中配置成質量分數為2％殼聚糖的醋酸溶液，將兩種溶液混合，并加入谷酰胺肽和透明質酸，攪拌均勻，靜置24-36小時，然后將得到的混合液在表面溫度為20℃的水平聚氯乙烯板上流延成膜，最后使用pH為7.2-7.4氫氧化鈉溶液浸泡12小時，晾干，即得。

5.如權利要求1-4任一項所述的含活細胞的組織工程皮膚的制備方法，其特征在于，步驟為：

(1)獲取角朊細胞與成纖維細胞

(2)制備仿真皮層

在4℃條件下，將生物支架材料與DMEM培養基按體積比1:1混合后，加入表皮細胞生長因子與堿性成纖維生長因子，接種成纖維細胞和角朊細胞的混合液，兩種細胞接種總密度為2×10⁶/ml，其中角朊細胞與成纖維細胞的密度比為0.1-0.2:1，37℃，5％CO₂孵箱中培養4-5天，然后置于培養皿中進行固化，形成仿真皮層；所述的表皮細胞生長因子、堿性成纖維生長因子與DMEM培養基的用量比為2-3ng:12-15ng:1ml；

(3)制備真皮層

將成纖維細胞接種到步驟(2)得到的仿真皮層表面，加入成纖維細胞培養基，接種密度為1×10⁶/ml，37℃，5％CO₂孵箱中培養1-3天，得到真皮-仿真皮層；

(4)制備表皮層

將角朊細胞接種到步驟(3)得到的真皮-仿真皮層的仿真皮層表面，加入表皮細胞培養基，接種密度為1×10⁶/ml，37℃，5％CO₂孵箱中培養6-8天，得到真皮-仿真皮層-表皮層；

(5)構建組織工程皮膚

將步驟(4)得到的真皮-仿真皮層-表皮層平鋪在培養皿的底部，加入含1×10^-4mol/L氯化鈣的DMEM培養基中，37℃，5％CO₂孵箱中培養6-8天，即得。