[發明專利]一種里氏木霉工程菌及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201710561319.5
• 申請日: 2017-07-11
• 公開（公告）號: CN109234177A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 姚斌;蘇小運;吳毅蘭;羅會穎;黃火清;柏映國;王苑;涂濤;馬銳;王亞茹;孟昆;馬建爽
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院飼料研究所
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N15/80;C12N9/04;C12R1/885
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 董濤

1.一種產葡萄糖氧化酶的里氏木霉，其特征在于，所述里氏木霉含有葡萄糖氧化酶的編碼基因god。

2.根據權利要求1所述的里氏木霉，其特征在于，所述里氏木霉還過表達內源的與蛋白分泌到胞外相關的蛋白的編碼基因snc1。

3.根據權利要求1和/或2所述的里氏木霉，其特征在于：

所述里氏木霉含有重組質粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T；和/或所述里氏木霉含有重組質粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T；

所述重組質粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T為將序列表中SEQ ID№：1所示核苷酸序列的第38-1787位核苷酸、SEQ ID№：2所示核苷酸序列的第26-1896位核苷酸、SEQ ID №：3所示核苷酸序列的第26-1525位核苷酸插入pRS424質粒的EcoRI酶切位點后獲得的；

所述重組質粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T為將序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的第26-1521位核苷酸、SEQ ID №：6所示核苷酸序列的第26-700位核苷酸、和SEQ ID №：7所示核苷酸序列的第26-1025位核苷酸插入pRS424質粒的EcoRI酶切位點后獲得的。

4.一種可產葡萄糖氧化酶的里氏木霉的制備方法，其特征在于，所述方法包括：將葡萄糖氧化酶的編碼基因god導入所述里氏木霉。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將內源的與蛋白分泌到胞外相關的蛋白的編碼基因snc1導入所述里氏木霉。

6.根據權利要求4和/或5所述的方法，其特征在于：

所述導入包括將重組質粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T導入所述里氏木霉；和/或所述導入還包括將重組質粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T導入所述里氏木霉；

所述重組質粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T為將序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列的第38-1787位核苷酸、SEQ ID №：2所示核苷酸序列的第26-1896位核苷酸、SEQ ID №：3所示核苷酸序列的第26-1525位核苷酸插入pRS424質粒的EcoRI酶切位點后獲得的；

所述重組質粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T為將序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的第26-1521位核苷酸、SEQ ID №：6所示核苷酸序列的第26-700位核苷酸、和SEQ ID №：7所示核苷酸序列的第26-1025位核苷酸插入pRS424質粒的EcoRI酶切位點后獲得的。

7.一種葡萄糖氧化酶的制備方法，其特征在于，所述方法包括下述1)-3)至少一種：

1)將葡萄糖氧化酶的編碼基因god導入所述里氏木霉；

2)所述方法還包括將內源的與蛋白分泌到胞外相關的蛋白的編碼基因snc1導入所述里氏木霉；

3)使里氏木霉表達導入的編碼基因即得。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述導入包括將重組質粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T導入所述里氏木霉；和/或所述導入還包括將重組質粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T導入所述里氏木霉；

所述重組質粒pRS424-cbh1P-god-cbh1T為將序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列的第38-1787位核苷酸、SEQ ID №：2所示核苷酸序列的第26-1896位核苷酸、SEQ ID №：3所示核苷酸序列的第26-1525位核苷酸插入pRS424質粒的EcoRI酶切位點后獲得的；

所述重組質粒pRS424-pdc1P-snc1-pdc1T為將序列表中SEQ ID №：5所示核苷酸序列的第26-1521位核苷酸、SEQ ID №：6所示核苷酸序列的第26-700位核苷酸、和SEQ ID №：7所示核苷酸序列的第26-1025位核苷酸插入pRS424質粒的EcoRI酶切位點后獲得的。