[發(fā)明專利]利用核ITS序列進(jìn)行榛種質(zhì)鑒定的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710561274.1
• 申請日: 2017-07-11
• 公開（公告）號(hào): CN107142330B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙天田;王貴禧;馬慶華;梁麗松
• 申請（專利權(quán)）人: 中國林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895
• 代理公司: 北京凱特來知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11260
• 代理人: 鄭立明;趙鎮(zhèn)勇

本發(fā)明公開了一種利用核ITS序列進(jìn)行榛種質(zhì)鑒定的方法，包括一對榛ITS序列的擴(kuò)增引物：正向引物：5'?AGTCGTAACAAGGTTTCCGT?3'；反向引物：5'?TCCTCCGCTTATTTATATGC?3'；利用正向引物和反向引物對標(biāo)準(zhǔn)種質(zhì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；利用正向引物和反向引物對待鑒定的目標(biāo)種質(zhì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；將以上兩個(gè)步驟得到的擴(kuò)增序列進(jìn)行比對，根據(jù)比對結(jié)果是否一致進(jìn)行榛種質(zhì)鑒定。該方法利用的ITS序列標(biāo)記鑒別能力強(qiáng)且重復(fù)性好，能夠有效的鑒別易混淆榛種質(zhì)資源或其他屬植物，對榛屬植物資源的種間分類、親緣關(guān)系分析及遺傳進(jìn)化分析提供了重要的技術(shù)支撐，同時(shí)對開展榛屬植物野生資源調(diào)查選優(yōu)及雜交育種具有重大的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種榛種質(zhì)鑒定的方法，尤其涉及一種利用核ITS序列進(jìn)行榛種質(zhì)鑒定的方法。

背景技術(shù)

榛為榛科(Corylaceae)榛屬(Corylus)植物，在這些榛種中既包含有喬木類型也涵蓋灌木類型(張宇和等，2005)。世界榛屬植物約有20個(gè)種，廣泛地分布在北半球的亞洲、歐洲、北美洲的溫帶地區(qū)。我國榛屬植物資源豐富，我國天然分布的有8個(gè)種和2個(gè)變種，分布范圍也很廣泛，經(jīng)濟(jì)利用價(jià)值較高。

20世紀(jì)50年代以來，我國榛屬植物的分類仍是完全依據(jù)形態(tài)特征進(jìn)行劃分，不同分類學(xué)家由于基于的形態(tài)尺度和依據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)不同，因而分類結(jié)果不盡相同。尤其對于我國榛屬植物種與變種的劃分，分類學(xué)家們存在很多分歧。胡先嘯(1948)在撰寫的《中國樹木圖志》中首次提出中國榛屬植物應(yīng)屬于榛科(Corylaceae)榛屬(Corylus)，其中包括6個(gè)種2個(gè)變種。陳嶸(1975)在《中國樹木分類學(xué)》中認(rèn)為中國榛屬植物應(yīng)劃分成3個(gè)種和3個(gè)變種。俞德浚(1979)在《中國果樹分類學(xué)》中將中國榛屬植物劃分成4個(gè)種2個(gè)變種。《中國植物志》(1979版)將我國榛屬植物劃分了7個(gè)種2個(gè)變種，并首次提及1個(gè)存疑種。鄭萬鈞(1985)在《中國樹木志》中介紹中國榛屬植物包含7個(gè)種和3個(gè)變種。梁維堅(jiān)(1988，2005)認(rèn)為川榛應(yīng)是一個(gè)獨(dú)立的種，并認(rèn)定了具有典型短柄特征的川榛變種短柄川榛。由此可見，植物分類學(xué)家對我國榛屬植物的分類存在很多爭議，對榛屬植物資源種類記載不一，分類地位不明確，這對我國榛屬植物資源的收集、保存及利用造成一定的影響，進(jìn)而影響榛屬植物雜交育種工作的開展。

高等植物的rDNA是由核糖體基因(轉(zhuǎn)錄單位)及與之相鄰的間隔區(qū)組成的高度重復(fù)串聯(lián)序列，真核生物核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS既有核苷酸序列的高度變異性又有長度上的保守性，豐富的變異可在較低的分類階元上(如種間)解決植物分類鑒別問題。ITS序列分析通過比較DNA分子中4種堿基序列排列的變化，反映生物體在遺傳上的變異，從分子水平理清其遺傳背景(Yang et al.,2007)，克服了傳統(tǒng)研究方法的弱點(diǎn)，提高了植物種質(zhì)資源鑒別的水平。至今未發(fā)現(xiàn)關(guān)于利用ITS序列進(jìn)行我國榛屬植物資源不同種間的系統(tǒng)發(fā)育和親緣關(guān)系研究的報(bào)道。

現(xiàn)有技術(shù)一：

形態(tài)學(xué)標(biāo)記是以植物的表型性狀為遺傳標(biāo)記，目前的榛屬植物分類主要依靠形態(tài)學(xué)的研究，依賴于表型的差異。從遺傳角度看，表型性狀分為數(shù)量性狀和質(zhì)量性狀兩類。但是表型性狀受環(huán)境、氣候、營養(yǎng)狀況等多種因素影響，往往提供的信息不夠全面，且依據(jù)形態(tài)進(jìn)行鑒別分類工作量大、周期長、成本高。例如：川榛和平榛兩者在樹形、葉片、花序及果實(shí)形態(tài)上非常相似，不易區(qū)分，尤其是在兩者交叉分布地帶經(jīng)?；煜?，給科研調(diào)查和生產(chǎn)利用帶來了很大困擾。又如，虎榛子屬的虎榛子和榛屬的毛榛在表型上也非常相近，不易區(qū)分。

現(xiàn)有技術(shù)二：